【试剂】 偶联有特异性抗体的微球 生物素标记抗体 链霉亲和素-PE 抗原标准品 抗体稀释液、缓冲液 【样本制备】 1. 加入45μL捕获微球混合悬液至流式管中 2. 分别加入标准品和稀释样本45μL,室温避光孵育1h 3. 洗涤后,加入25μL生物素偶联的检测抗体,室温避光孵育30min 4. 洗涤后,加入25μL链霉亲和素标记的PE工作液,室温避光孵育20min 5. 洗涤后,加入150μL洗液,重新悬浮微球,在BriCyte E6流式细胞仪上测定 详细操作步骤请参见试剂说明书。 【数据采集和分析】 采用BriCyte E6流式细胞仪配套MRFlow软件进行数据采集 1. 建FSC/ SSC线性散点图,区分不同大小的微球;较小的微球群设为P1,较大的微球群设为P2 2. 建PE/ APC(编码微球的荧光素)散点图,分别分析P1、P2门内微球,确定各因子位置,设门圈出各因子 3. 建PE直方图,依次分析2中所有因子,确定各因子在PE方向的荧光强度MFI 4. 以相同条件分别测试抗原标准品及待测样本,计算各个细胞因子浓度
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