血栓素A₂(TXA₂)主要是由血小板微粒体合成并释放的一种具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性物质。其生物半衰期约三十秒钟，迅速代谢为无活性的TXB₂。血管壁内皮细胞合成和释放另一种抗血小板聚集和舒张血管的生物活性物质，称之为前列环素PGI₂ ，生物半衰期约3分钟,迅速代谢生成6-酮-前列腺素F_1a(6-Keto-PGF_1a). 在正常生理状态下血浆或组织中TXA₂和PGI_2,平衡失调是造成血小板聚集，血管痉挛收缩或血栓形成的原因之一。因此，测定这两种化合物在血浆组织及其它体液中的浓度，在基础医药学理论研究，临床血栓形成病的发病预测，疗效判断具有十分重要的意义。

 

由于TXA₂和PGI₂的不稳定性，目前难以直接测定，故国内外均以测定TXB₂和6-Keto-PGF_1a作为判断其浓度的指标。本试剂盒对血浆或其它样品不经提取直接测定，操作程序十分简便，灵敏度高，重复性好，特别适合大量样品的测定。

药盒的组成与配制：（常温运输，4℃保存）

１、TXB₂标记一瓶，不用稀释，直接用。

2、TXB₂抗体一瓶，50T用缓冲液 5.5 ml溶解；  100T用缓冲液 10.5 ml溶解。

３、缓冲液  1瓶（30ml）.

４、分离剂一瓶（第二抗体）。

5、TXB₂标准品一瓶 (0.8 ng/瓶),

临用前加缓冲液 1 ml，浓度为800pg/ml，，作为S_７，另取试管6支，编号S₆ ~S₁，各加缓冲液 0. 5 ml，从S₇中取0. 5ml加到S₆，依次倍比释至S₁，浓 度为 12.5、25、50、100、200、400、800 pg/ml。 

 

1、  血浆：取一次性5ml空针吸取消炎痛-EDTA. Na2 0.2ml快速静脉穿刺取血3ml即刻在针内颠倒混匀，注入试管内，4℃3500rpm/ min离心15min，分离血浆，-20℃保存。

 

2、  组织：取新鲜活组织即刻置液氮中保存。或快速称取一定重量（依组织不同可称5-200mg），置微型匀浆器中，加无水乙醇0.1ml研磨，再加生理盐水0.9ml充分研磨制成匀浆， -20℃以下保存，测定前4℃离心（3500 rpm/ min 15min）取上清。

 

3、         尿液：尿液收集12小时晚7时排尿弃去，向容器内加冰醋酸或甲苯4ml防腐，至次日早7时留取12小时内尿液收集至瓶中，混匀，量总ml数，留5ml放-20℃以下保存。测定前调至pH 7.0。

 

测定方法：本法采用平衡法，全部测定在聚苯乙烯管中进行。

                           TXB₂  RIA   操作程序        （单位：ul）

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               试   剂      T     NSB     S₀     S₁~S₇    样  品

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               缓冲液      ——    300     200     ——    ——

               标 准 品    ——    ——    ——    200     ——

               样    品    ——    ——    ——    ——     200

               抗    体    ——    ——    100     100      100                                                            

               ¹²⁵I-­ TXB₂     100     100     100     100      100              

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                           充分混匀，4℃24小时

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               分 离 剂    ——      500     500   500      500

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混匀，室温放置15分钟， 3500转/分  4℃离心20分钟，去上清，测定沉淀cpm值。

 

    以N/T、B/T计算NSB，S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。

    NSB：<5%。标准曲线范围：12.5~800 pg/ml。  

    灵敏度：<12.5pg/ml。精密度：批内CV<3.5%,批间CV<10%。       

    特异性：本试剂盒对其它花生四烯酸代谢产物交叉反应CV<0.1%。

    正常参考值：74.03±17.42pg/ml(n=25)。

附注：1、血液采集后尽快分离血浆，放-20℃以下保存至少3个月内稳定。

             2、¹²⁵I标记抗原在有机溶剂中放4℃保存相当稳定，有效期40天。

                   3、血浆经-20℃以下保存常出现蛋白絮状物，取出达到室温后混匀，4℃离心

                      后取上清液测定对结果无影响。

             

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           T     NSB       S₀          S₁      S₂      S₃        S₄      S₅     S₆      S₇  

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     CPM                       

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               N/T% 3.6  B₀/T%  56  B/ B₀ %  95      79     61     39     20     8      4

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  生产日期：2007-4-25

  有效日期：2007-5-31