降钙基因相关肽放免药盒操作说明书
CGRP(HY-10045) RIA KIT
降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide CGRP)是近年来在人和哺乳动物体内发现的一种生物活性物质。CGRP广泛分布于中枢和外周神经系统以及某些器官组织中,它是目前已知最强的舒血管物质。对各系统特别是心血管系统有着重要的调节作用。
CGRP在机体病理条件下的防御和代偿意义已受到高度重视。一般认为在正常生理状态下,血浆CGRP和内皮素(ET)浓度保持相对恒定。因此,测定血浆CGRP对于研究心肌缺血、脑卒中、高血压、体外循环、血管再通以及组织移植都具有广阔的临床前景。
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1、 缓冲液(PBS)1瓶,用时每瓶加蒸馏水至50ml
2、PR分离剂(第二抗体)1瓶:用前充分摇匀
3、CGRP抗体1瓶。 4、125I- CGRP 1瓶:
5、CGRP标准品6瓶,浓度为20、60、150、300、600、1200pg/ml。
样品收集:
1、血浆采集:
取静脉血3ml ,注入含10%EDTA.Na2 30ul和抑肽酶10ul(含100U/ml以上)的试管中混匀,4℃3000rpm/ min离心10min分离血浆,-20℃保存2个月,-70℃以下保存 半年。测定前,使样本置于室温或冷水中复融,混匀后,再次4℃3000rpm/ min离心5min,取上清测定。
2、组织样品的处理:
取出活组织,吸去血迹,称重,尽快放入1N HAC 1ml略做碾磨,然后在100℃水中煮沸10min,匀浆。4℃3000rpm/ min离心15min,取上清-20℃以下保存,测定时用PBS五倍以上稀释,以调节PH值。每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标本最好单独做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
测定方法:(非平衡法加样)
CGRP RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品
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缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
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摇匀4℃ 放24小时
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125I- CGRP 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。
注:测定兔标本时,应改用功25% PEG 作分离剂,每管加500ul,NSB、S0、S1~S6管补加正
常人血清100ul/管(或r-球蛋白100 ul/管);U、U0管加PBS 100ul/管。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:
本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1. NSB:5%。
2. 灵敏度:<15pg/ml。
3. 标准曲线范围:20~1200pg/ml。
4. 批内变异系数:CVw<7.0 %。
5. 批间变异系数:CVw < 12.0% 。
6. 特异性:本抗血清与内皮素(ET)、胃动素(MTL)、骨钙素(BGP)、C端甲状旁腺素(C-PTH)、降钙素(CT)等多肽均无交叉反应。
7. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
50.6±24.5pg/ml(n=25)。
本次药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期:
有效日期:
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