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C-型利钠肽放免药盒操作说明书
CNP HY-10048 RIA  KIT
 
      C-型利钠肽(C- Eype natriuretic peptide CNP)是1990年由Sudoh等人从猪脑中分离出来的,利钠利尿肽家族的另一新成员,主要分布于中枢神经系统和肾上腺髓质、精液和气管粘膜也含有较多的CNP。血管内皮细胞分泌的CNP主要以旁分泌的方式发挥其调节血管紧张度的作用。我们用自制抗CNP血清,研制成灵敏可靠的CNP一RIA试剂盒,对深入研究CNP的生物学作用,药理作用以及和临床的关系具有非常重要的意义。
测定盒组成:
1、125I-CNP 标记一瓶。          2、CNP 抗体一瓶。
3、CNP 标准品六瓶:5、15、45、135、270、600pg/ml。
4、缓冲液一瓶。                5、分离剂(第二抗体)一瓶。
6、抑肽酶一瓶。                7、10%EDTA . Na2一瓶。
   
样品收集:
1、   取静脉血2 ml,注放含有10%EDTA . Na2 30 ul和抑肽酶40 ul的试管中混匀,4℃ 3500转/分 离心10分钟,分离血浆(溶血样品影响测定结果)。如果需要可分装2-3份。放-20℃样品可保存2个月,在-70℃以下可以保存半年。测定前,将样本置于室温或冷水中复融,混匀,再次4℃ 3000转/分 离心10分钟,取上清测定。
2、   组织样品处理:取出活组织,吸去血迹,称重、尽快放入0.1mol/L HAC 1ml轻轻碾磨,然后在100℃水浴中煮沸10分钟,再次碾磨制成匀浆,4℃ 3000转/分 离心15分钟,取上清-20℃保存,测定时用缓冲液五倍以上稀释,以调节PH值,每种组织样品的非特异结合(U0)可能有差异,每种标本最好单独做一个U0,取组织的重量视不同组织而定。
   
测定方法:
                           CNP   RIA  操作程序       (单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂      T     NSB     S0      S1~S6     样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    300     200     ——      ——
               标 准 品    ——    ——    ——    200       ——
               样    品    ——    ——    ——    ——      200
               抗    体    ——    ——    100     100       100
             ————————————————————————————
                             摇匀37℃ 放置6小时以上
             ————————————————————————————
               125I-CNP     100      100     100     100       100
            ————————————————————————————                   
                             摇匀4℃ 放置过夜
            ————————————————————————————
               分 离 剂     ——     500     500    500     500
            ————————————————————————————
      混匀,室温放置20分钟后,3500 转/分 离心20分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
  
    结果计算:
     以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
 
   注意事项:   
     本月标准品每瓶用    0.8    ml缓冲液稀释   
     本月药盒抗体每瓶用  10.5    ml缓冲液稀释
         本月药盒标记每瓶用   10.5   ml缓冲液稀释    
        本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
 
  本试剂盒主要技术参数:    
         测定范围:5~600pg/ml。   
     灵敏度: 5pg/ml。
     精密度:批内CV为<10%    批间CV为 <15%。
     正常参考值:19.96±5.56pg/ml(n=83)
                 各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
 
    本月药盒参考数据:
        ————————————————————————————————
            T     NSB     S0         S1     S2    S3    S4    S5      S
        ————————————————————————————————
        CPM
        ————————————————————————————————
              N/T%  1.8  B0/T%  52   B/ B0 %  90       83       70      41       28       15
        ————————————————————————————————   
      生产日期:
      有效日期:
 
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