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                                   胆囊收缩素放免试剂盒操作
                                    CCK-33 HY-10049  RIA   KIT
 
     胆囊收缩素(Cholecystokinin CCK)是1982年Loy和Oldhery发现,分子量为3949.94D。在脂类食物作用下,小肠粘膜放出一种化学物质,通过血液循环作用于胆囊,引起胆囊收缩和排空,CCK在体内以多种分子形式存在,一种是由33个氨基酸残基组成(CCK-33),另一种则含有39个氨基酸残基(CCK-39),它们的氨基酸排列顺序相同,只是在肽链的氨基端增加了6个氨基酸。胆囊收缩素是具有广泛生物活性的肽,主要作用:对消化系统分泌机能的影响。它主要作用于胰腺泡细胞,引起胰酶分泌,对肝胆汁分泌和小肠腺分泌有一定刺激作用。对消化系统、运动机能的影响:具有强烈收缩胆囊研究,认为它是一种神经递质。其应用范围:广泛用于胆囊和胰腺机能,胃泌素瘤诊断。胆囊收缩素与中枢神经系统疾病关系的研究。
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。
 
药盒组成:
  1、CCK抗体一瓶。             2、125I- CCK 标记一瓶。 
  3、缓冲液一瓶。                4、分离剂(第二抗体)一瓶。
6、CCK标准品5瓶浓度为:0.5、 1.2、 2.5、 10、 50 pmol/L
    测定方法:
                         CCK   ­ RIA  操作程序      (单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂       T      NSB     S0     S1~S10    样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——     200     100     ——      ——
               标 准 品    ——     ——    ——     100      ——
               样    品    ——     ——    ——    ——      100
               抗    体    ——     ——    100      100      100        
               125I- CCK   100       100     100      100      100    
             ————————————————————————————   
                                摇匀,4℃ 24小时
             ————————————————————————————
               分 离 剂    ——     500     500      500     500
             ————————————————————————————
       混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
 
 
结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
  注意事项:
     本月药盒抗体每瓶用            ml缓冲液稀释
     本月药盒标记每瓶用            ml缓冲液稀释
     本月药盒标准品每瓶用          ml缓冲液稀释
     本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
 
测定前,血浆标本推荐过C18拄。
附:血浆标本过柱步骤:
   1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分  离心20分钟,取上清。
   2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
   3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
   4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
   5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
   6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
   7、取干燥后的西林瓶用500 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实验
时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA     TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种
试剂(或材料)。
   正常参考值:1.0-3.1pmol/L
   本月药盒参考数据:
       ————————————————————————————————
            T    NSB     S0        S1    S2   S3   S4     S5     S6     S   S8  
        ————————————————————————————————
        CPM
        ————————————————————————————————
                 N/T%      B0/T%    B/ B0 %
        ———————————————————————————————— 
备注:该说明书由英国皇家医学院内分泌部《CCK-33药盒操作说明书》翻译而来。
      (注:本实验操作程序略有改动)
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