胆囊收缩素（Cholecystokinin CCK）是1982年Loy和Oldhery发现，分子量为3949.94D。在脂类食物作用下，小肠粘膜放出一种化学物质，通过血液循环作用于胆囊，引起胆囊收缩和排空，CCK在体内以多种分子形式存在，一种是由33个氨基酸残基组成(CCK-33),另一种则含有39个氨基酸残基（CCK-39），它们的氨基酸排列顺序相同，只是在肽链的氨基端增加了6个氨基酸。胆囊收缩素是具有广泛生物活性的肽，主要作用：对消化系统分泌机能的影响。它主要作用于胰腺泡细胞，引起胰酶分泌，对肝胆汁分泌和小肠腺分泌有一定刺激作用。对消化系统、运动机能的影响：具有强烈收缩胆囊研究，认为它是一种神经递质。其应用范围：广泛用于胆囊和胰腺机能，胃泌素瘤诊断。胆囊收缩素与中枢神经系统疾病关系的研究。

标本采集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。

 

  1、CCK抗体一瓶。             2、¹²⁵I- CCK 标记一瓶。 

  3、缓冲液一瓶。                4、分离剂（第二抗体）一瓶。

6、CCK标准品5瓶浓度为：0.5、 1.2、 2.5、 10、 50 pmol/L

                         CCK   ­ RIA  操作程序      （单位：ul）

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               试   剂       T      NSB     S₀     S₁~S₁₀    样  品

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               缓 冲 液    ——     200     100     ——      ——

               标 准 品    ——     ——    ——     100      ——

               样    品    ——     ——    ——    ——      100

               抗    体    ——     ——    100      100      100        

               ¹²⁵I- CCK   100       100     100      100      100    

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                                摇匀，4℃ 24小时

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               分 离 剂    ——     500     500      500     500

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       混匀，室温放置20分钟，4℃3500转/分 离心15分钟，去上清，测定沉淀cpm值。

 

 

    以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.

     本月药盒抗体每瓶用            ml缓冲液稀释

     本月药盒标记每瓶用            ml缓冲液稀释

     本月药盒标准品每瓶用          ml缓冲液稀释

     本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）

 

测定前，血浆标本推荐过C18拄。

   1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分  离心20分钟，取上清。

   2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C₁₈ 柱进行平衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。

   3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C₁₈柱中。

   4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C₁₈ 柱。

   5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C₁₈，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。

   6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。

   7、取干燥后的西林瓶用500 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实验

时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。

Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA     TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种

试剂（或材料）。

   正常参考值：1.0-3.1pmol/L

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            T    NSB     S₀        S₁    S₂   S₃   S₄     S₅     S₆     S₇     S₈  

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        CPM

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                 N/T%      B₀/T%    B/ B₀ %

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备注：该说明书由英国皇家医学院内分泌部《CCK-33药盒操作说明书》翻译而来。

      （注：本实验操作程序略有改动）

Department of  Endocrinology  Royal  Postgraduate Medical School