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肾上腺髓质素放免药盒操作说明书
                                                                       ADMHY-10058 RIA   KIT
 
      肾上腺髓质素(Adrenomedullin  ADM)是一种由52个氨基酸组成,分子量为6028.8Da的内源性血管活性肽,广泛分布于内分泌、神经、心血管、呼吸、泌尿、消化等系统中,其中以肾上腺含量最高,肺和心脏次之。其主要生物学作用:扩张血管,具有强力、长效降压作用;增加肾小球滤过率和肾血流量,具有利尿、利纳作用。对血流动力学作用:使平均动脉压显著降低,心率、心输出量、每博容量显著增加。目前研究发现:ADM(16-52及23-52)可使血糖降低,胰岛素升高。ADM能显著抑制小牛血清和血小板衍化生长因子-BB所致的血管平滑肌细胞的迁移,表明ADM可能作为局部抗迁移因子在某些病理、生理状态中起作用。ADM与ET相互作用,共同维持循环系统功能的稳定状态,由于ADM广泛存在于中枢神经系统,提示有可能作为一种神经递质或神经激素,发挥生物学作用。根据免疫竞争原理,用非平衡法建立检测血浆ADM水平的放射免疫分析方法。
标本收集:空腹抽静脉血4ml于特凝管中(含有10%EDTA . Na2 30ul和抑肽酶40ul),实验前标本需过 C18柱。
 
    该药盒主要应用范围:
  * 高血压、冠心病的研究。
  * 糖尿病、肺心病、肾病的研究。
  * 血流动力学的研究。
  * ADM与其他激素关系的研究。
 
    药盒组成:
1.  ADM标记一瓶;       2.ADM抗体一瓶;
3. ADM标准品5瓶,分别为10、20、40、80、160pg/ml。
4. 缓冲液一瓶;        5.分离剂(第二抗体)一瓶。
 
    操作方法:
                        ADM   RIA  操作程序             (单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂      T     NSB      S0     标准品    标  本
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
               标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
               标    本    ——    ——    ——    ——      100
               抗    体    ——    ——    100     100       100
             ————————————————————————————
                       充分混匀,放4℃  24小时
             ———————————————————————————— 
               125I- ADM    100     100     100     100       100
            ————————————————————————————                   
                        充分混匀,4℃  24小时
            ————————————————————————————
               分 离 剂     ——    500     500    500       500
            ————————————————————————————
混匀,室温放置1.5小时后,3500转/分 离心 20分,去上清,测沉淀CPM值。
 
 结果计算:
        以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在
   半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
 
   注意事项:
     本月每瓶标准品用             ml缓冲液稀释;
     本月每瓶抗体用               ml缓冲液稀释;
     本月每瓶标记用               ml缓冲液稀释。  
 
   本试剂盒主要技术参数:
       NSB:<5%。      
       灵敏度:<25pg/ml。
       精密度:批内CV<7.7%,批间C
   正常参考数据:18.16±7.5 Pg/ml
   附:血浆标本过柱步骤:
   1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
   2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
      衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
   3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
   4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
   5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
   6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
   7、取干燥后的西林瓶用250 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实
      验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
   8、结果计算:最终浓度×5.0
     Sep-Pak C-18: Waters.inc.       Massachusetts.USA    TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种试剂(或材料)。
该说明书由英国皇家医学院内分泌部《ADM药盒操作说明书》翻译而来。
Department of  Endocrinology  Royal  Postgraduate  Medical  School
   本次药盒参考数据:    
             ——————————————————————————————
                    T     NSB     S0           S1     S2   S   S4    S5     
             ——————————————————————————————
              CPM
             ——————————————————————————————
                      N/T%      B0/T%      B/ B0 %
             ——————————————————————————————   
        生产日期:
        有效日期:
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