胰高血糖素放免药盒操作说明书
PG(HY-10073)RIA KIT
胰高血糖素(Pancreas Glucagon PG)是29个氨基酸残基组成的单链多肽激素,分子量3485,主要为胰岛A细胞分泌,是维持体内血糖稳定的主要因素之一。氨基酸能刺激胰高血糖素的分泌,糖类能减少胰高血糖素的分泌、分解。不同的抗血清对胰高血糖素与各种不同分子量的肠胰高血糖素样物质有不同的交叉反应。临床上胰高血糖素升高见于糖尿病、肥胖病、高血脂症、慢性肝病及慢性肾功能衰竭及胰岛α细胞瘤等。
药盒组成:
1、 125I-PG(冻干品)1瓶; 2、 PG抗体 1瓶
3、 缓冲液1瓶; 4、免疫沉淀剂(第二抗体)1瓶;
5、 PG标准品(冻干品)1瓶, -20℃保存,用缓冲液 3 ml稀释,则成为800pg/ml,然后倍
比稀释,稀释成各点,分别为800、400、200、100、 50、0pg/ml,此标准品溶解后只使
用一次。
6、 抑肽酶 、0.5M EDTA-Na2 各1瓶 。
样品收集:
1、在玻璃试管内预先加入抑肽酶0.1ml,再加入0.5M EDTA-Na2 20ul(5),4℃保存备用。
静脉采血2 ml加入上述试管内,轻轻混匀,立即离心分离血浆,-20℃保存。
2、如若测定“游离胰高糖素”,去除肠胰高糖素样物质须将上述血浆样品用丙酮提取。其
方法为:取血浆0.4ml加丙酮0.8ml 在冰浴下摇动混合40分钟,低温离心2000g×15
分钟,取上清液置另一试管,用压缩空气吹干,约需40分钟,用缓冲液0.4ml溶解,振
荡5分钟,再按测定方法进行测定。
3、本测定盒的样品测定,建议采用75克葡萄糖耐量试验或馒头餐试验方法进行样品采集,
如做胰高糖素释放试验,可用标准蛋白试验方法进行样品采集。
测定方法:(整个试验操作均在冰浴中进行,否则容易失活)
PG RIA 操作程序(单位:ul)
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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抑 肽 酶 —— —— 50 50 50
缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
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混匀,2~8℃温育4小时
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125I- PG 100 100 100 100 100
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充分混匀,2~8℃温育20—24小时
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免疫沉淀剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温静置15分,3500 转/分 离心15分钟,去上清,测沉淀cpm值。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项:
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释 ;
本月分离试剂在使用前充分混匀(不可冰冻)。
本试剂盒主要技术参数:
NSB:<5%
标准曲线范围:0~800 pg/mL。
灵敏度:<5pg/ml
精密度:批内CV为7%,批间CV为 10%
正常参考值:
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空 腹 1小时 2小时 3小时
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正 常 总胰高糖素(n=60) 81.44±32.17 68.62±28.90 66.99±30.18 73.23±32.15
胰高糖素 (n=30) 58.12±16.87 33.46±16.30 28.79±13.22 29.75±14.32
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Ⅰ型糖尿病总胰高糖素(n=20)183.10±35.01 200.55±37.60 178.67±47.67 156.57±38.08
胰高糖素 (n=7) 106.02±39.83 111.20±44.71 104.20±48.19 89.60±47.71
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Ⅱ型糖尿病总胰高糖素(n=60)145.88±37.54 153.42±46.25 140.55±45.70 135.50±45.36
胰高糖素 (n=7) 69.71±20.83 80.14±27.30 69.86±41.18 71.14±33.93
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肝硬化总胰高糖素(n=65)329.68±168.7 363.22±164.0 327.30±175.2 305.2±59.9
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肾功能竭衰 总胰高糖素(n=5) 827±253 672±375 676±246 714±326
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本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期:
有效日期:
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