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糖尿病相关多肽免疫试剂盒说明书
                                                                       IAPP(HY-10071)   RIA   KIT
     糖尿病相关多肽(Diabetes Associate Polypeptide DAP)又名淀粉不溶素(Amylim)又称胰岛淀粉样多肽(Islet Asmyloid Polypeptide IAPP)由37个氨基酸的多肽,分子量为3901.85,IAPP和胰岛素关系密切,可修饰靶器官对胰岛素的反映,降低胰岛素周围组织中的敏感性,抑制糖的摄取和糖元合成,高浓度可抑制胰岛素分泌,当其在胰岛B细胞局部大量蓄积时,可损伤胰岛B细胞并拮抗胰岛素作用。
IAPP和II型糖尿病发病关系密切,在II型糖尿病发病过程中起非常重要作用,目前已成为国际上进行糖尿病临床研究和各种体内,体外试验中(如动物试验,胰腺组织培养、胰岛细胞移植等研究中)监测胰岛B细胞功能重要指标。IAPP与其它一些内分泌疾病的关系有待研究。
标本采集:
1、采血前加抗凝剂肝素15国际单位/ml(或10%EDTA.Na2 30uL)处理血样试管
2、采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)血样,采血后立即置冰中,30分
   钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血清置-20℃待测,可保存3-6个月。
药盒组成:
  1、IAPP抗体一瓶。             2、125I-IAPP一瓶。 
  3、IAPP标准品一瓶。           4、缓冲液一瓶。
  5、分离剂(第二抗体)一瓶。      
测定方法:
                              IAPP  ­ RIA  操作程序      (单位:ul)
                     ————————————————————————————
                       试   剂       T      NSB     S0     S1~S7    样  品
                     ————————————————————————————
                     缓  冲  液    ——     300     200     ——      ——
                     标  准  品     ——     ——    ——    200      ——
                     样      品     ——     ——    ——    ——      200
                     抗      体     ——     ——    100     100      100             
                 125I- IAPP       100      100     100      100      100    
                    ————————————————————————————   
                                       摇匀,4℃  48小时
                    ————————————————————————————
                       分 离 剂    ——     500     500      500      500
                    ————————————————————————————
          混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
附:血浆标本过柱步骤:
      1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分  离心20分钟,取上
          清。
       2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
            衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
       3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
       4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
       5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
       6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
       7、取干燥后的西林瓶用250 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实
           验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
            Sep-Pak C-18:  Waters.inc. 
            Massachusetts.USA  
           TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种试剂(或材料)。
正常参考值:
每个实验室都应根据本实验室条件及所接触人群做出自己的正常值
 
本月药盒参考数据:
      ————————————————————————————————————————
            T     NSB        S0           S1      S    S3          S4      S5    S6   S7
     ————————————————————————————————————————
     CPM
     ————————————————————————————————————————
                 N/T%      B0/T%      B/ B0 %
     ————————————————————————————————————————
 
      生产日期:
      有效日期:
   
 
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