肿瘤坏死因子放免试剂盒操作说明书
TNFα(HY-10116) RIA KIT
肿瘤坏死因子(Tunmor necros factor-α TNFα)是八十年代发现由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的细胞因子。由157个氨基酸组成、分子量为17KD的多肽。其主要生物学作用:参与抗感染、凝血、发热、休克、多器官功能衰竭、恶病质等多种病理生理过程;对白细胞、内皮细胞等多种细胞的功能及细胞的生长与分化均有激素样作用,同时对肿瘤坏死退化产生积极作用。因此,测定血清或其它体液中的TNF浓度,在基础医药学和多种疾病诊断研究中是一项很有价值的指标。
本药盒采用液相竞争法,标记TNF和待测样品中的TNF竞争性的与特异抗体结合,以PR试剂为分离剂,操作简便、准确性和灵敏度高。
标本的收集:取静脉血2ml于试管中,凝固分离血清,-20℃保存二个月
药盒组成:
1、TNFα标记一瓶
2、TNFα抗体一瓶
3、缓冲液一瓶
4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、TNF标准品六瓶3、9、27、81、243pg/ml。
测定方法
TNF α RIA 操作程序 (单位:ul)
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
零 标 准 —— —— 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- TNFα 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放置24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟, 3500转/分 离心15分钟,弃上清,测沉淀CPM。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在半对
数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读结果。
注意事项:
1、本月药盒抗体每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释
2、本月药盒标记每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释
3、本月标准品每瓶用 0.5 ml缓冲液稀释.
4、本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
主要技术指标:
1、NSB:< 7% ,S0 30~40%
2、标准曲线范围:3~243pg/ml。
3、灵敏度:最小检出值:<0.3pg/ml .
4、准确性:回收率平均:95 ~106%。
5、批内变异系数:CV 5%;
批间变异系数:CV 8% 。
正常参考值:50例正常人血清平均:54±10.40pg/ml
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% 2.7 B0/T% 68 B/ B0 % 95 78 65 37 15
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生产日期:2007-3-30
有效日期:2007-4-30
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