胰多肽放免试剂盒操作说明书
PP (HY-10163) RIA KIT
胰多肽(Pancreatic Polypeptide PP)由36个氨基酸组成的直链多肽,分子量为4179.06,是由位于胰岛内PP细胞分泌。血液中PP主要来源为胰腺。PP与CCK作用相反,PP抑制胰酶分泌和胆囊收缩,可抑制胆红素排出量,对糖元分解有促进作用,并促进脂肪形成,进食引起PP释放。近来有实验证明VIP、GIP、GH等可抑制PP释放。本药盒的应用范围是:糖尿病、胰腺炎、胰腺内分泌细胞瘤、消化性溃疡、胃癌、胆石症、肝硬化、肥胖症等PP有明显变化。
药盒的组成:
1、PP标准品 1瓶,用1ml的缓冲液稀释,浓度为1pmol/ml,然后取出0.5ml
进行倍比稀释,其浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.625pmol/ml;
2、125I-PP 1瓶; 3、抗体1瓶;
4、缓冲液1瓶; 5、分离剂(第二抗体)1瓶;
6、EDTA.Na2 1 瓶; 7、抑肽酶 1瓶。
样品收集:
1、 血浆采集:
取静脉血3ml ,注入含10%EDTA.Na2 30ul和抑肽酶40ul的试管中混匀,4℃ 3000rpm/ min 离心10min分离血浆,-20℃保存2个月,-70℃以下保存半年。测定前,使样本置于室温或冷水中复融,混匀后,再次4℃3000rpm/ min离心5min,取上清测定。
2、 组织样品的处理:
取出活组织,吸去血迹,称重,尽快放入1N HAC 1ml略做碾磨,然后在100℃水中煮
沸10min,匀浆。4℃3000rpm/ min离心15min。取上清-20℃以下保存,测定时用PBS
五倍以上稀释,以调节PH值。每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标
本最好单独做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
测定方法:
PP RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- PP 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放72小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟,4℃ 3500转/分 离心20 分钟,弃上清液,测定沉淀cpm数。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分
率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先
编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
1、 灵敏度:<10pmol/ml。
2、 批内变异系数:CVw<5.50 %。
3、 批间变异系数:CVw < 9.10% 。
4、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
注意事项:
本月药盒抗体用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记用 ml缓冲液稀释
本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期:
有效日期:
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