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  多肽及试剂盒
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胰多肽放免试剂盒操作说明书
                                                                 PP HY-10163 RIA   KIT
 
      胰多肽(Pancreatic  Polypeptide  PP)由36个氨基酸组成的直链多肽,分子量为4179.06,是由位于胰岛内PP细胞分泌。血液中PP主要来源为胰腺。PP与CCK作用相反,PP抑制胰酶分泌和胆囊收缩,可抑制胆红素排出量,对糖元分解有促进作用,并促进脂肪形成,进食引起PP释放。近来有实验证明VIP、GIP、GH等可抑制PP释放。本药盒的应用范围是:糖尿病、胰腺炎、胰腺内分泌细胞瘤、消化性溃疡、胃癌、胆石症、肝硬化、肥胖症等PP有明显变化。
 
    药盒的组成:
    1、PP标准品 1瓶,用1ml的缓冲液稀释,浓度为1pmol/ml,然后取出0.5ml
       进行倍比稀释,其浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.625pmol/ml;
      2、125I-PP 1瓶;                3、抗体1瓶;   
     4、缓冲液1瓶;                   5、分离剂(第二抗体)1瓶;
     6、EDTA.Na2 1 瓶;            7、抑肽酶 1瓶。
 
    样品收集:
1、  血浆采集:
    取静脉血3ml ,注入含10%EDTA.Na2  30ul和抑肽酶40ul的试管中混匀,4℃      3000rpm/ min  离心10min分离血浆,-20℃保存2个月,-70℃以下保存半年。测定前,使样本置于室温或冷水中复融,混匀后,再次4℃3000rpm/ min离心5min,取上清测定。
2、  组织样品的处理:
取出活组织,吸去血迹,称重,尽快放入1N HAC 1ml略做碾磨,然后在100℃水中煮
沸10min,匀浆。4℃3000rpm/ min离心15min。取上清-20℃以下保存,测定时用PBS
五倍以上稀释,以调节PH值。每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标
本最好单独做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
 
     测定方法
                           PP    RIA加液程序  (单位: ul )
             ————————————————————————————
               试   剂       T     NSB     S0     S1~S5     样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——     300     200    ——      ——
               标 准 品    ——    ——    ——    200       ——
               样    品    ——    ——    ——   ——       200
               抗    体    ——    ——    100     100       100
               125I- PP       100     100    100     100       100
            ————————————————————————————                   
                             摇匀4℃ 放72小时
            ————————————————————————————
                分 离 剂   ——     500     500    500      500
            ————————————————————————————
  混匀,室温放置15分钟,4℃ 3500转/分 离心20 分钟,弃上清液,测定沉淀cpm数。
 
    结果计算:
        以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分
率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先
编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
 
    本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
1、  灵敏度:<10pmol/ml。
2、  批内变异系数:CVw<5.50 %。
3、  批间变异系数:CVw < 9.10% 。
4、  正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。             
 
     注意事项:      
      本月药盒抗体用     ml缓冲液稀释         
      本月药盒标记用     ml缓冲液稀释 
          本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)。
 
     本月药盒参考数据:
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           T       NSB       S0            S1        S2           S3        S4         S5      
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————
       
        生产日期:
        有效日期:
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