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神经降压素放免药盒操作说明书
                                                                             NTHY-10169 RIA  KIT
 
      神经降压素(Neurotensin  NT)是一种首先由牛的下丘脑中提取的13个氨基酸组成的生物活性多肽,分子量1673。其后发现NT也存在人和其它哺乳动物的胃肠道中,因而是一种脑肠肽。它除了具有强烈舒血管,降血压作用外,还有显著镇痛作用等。现有研究表明,血浆和脑脊液中NT的浓度与心血管疾病、消化道疾病、神经系统疾病的发生和发展有密切联系。并有报道,某些肝癌、胰腺癌、小肠癌患者血中NT水平升高。因此,本药盒的建立,为基础医学与临床研究NT对人体的生理和病理作用机制提供了可靠手段。
测定盒的组成
1、 缓冲液一瓶。   
2、 PR分离剂(第二抗体 )一瓶。
3、 NT 抗体一瓶。
4、 NT标记一瓶 。
     5、NT标准品五瓶:20、60、180、540、1620pg/ml。
   6、抑肽酶一瓶。
     7、10%EDTA.Na2一瓶。
样品收集:
1、  取空腹静脉血4ml注入含10%EDTA.Na2 40ul和抑肽酶10ul(含100U/ml以上)的试管中,混匀4℃,3000rpm/ min离心10min,分离血浆(溶血样品影响测定结果)。如需要可分装2-3份保存,放-20℃可保存。测定前,使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃,3000rpm/ min离心5min,取上清测定。
2、  组织样品的处理:取出活组织,吸去血迹,称重,尽快放入0.5mol/L醋酸 1ml略做碾磨,然后在100℃水浴中煮沸10分钟,匀浆。4℃,3000rpm/ min离心15min,取上清放-20℃以下保存,测定时用PBS稀释,以调节至PH7.4。另外,每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标本最单独做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
3、  血浆样品处理:血浆0.5ml,加无水乙醇1ml,混匀,4℃ 3000rpm/ min离心10min,将上清全部移入青霉素小瓶内,放在45℃水浴锅上蒸干  大约24小时样品可以完全干燥,干燥后将青霉素瓶加盖封口,放-20℃保存。测定前每瓶加PBS0.5ml溶解,取出200ul检测。
4、  脑脊液样品:每ml脑脊液加抑肽酶500KIU,-20℃保存。
      注意事项:
     1、本月标准品每瓶用         ml缓冲液稀释  
        本月药盒抗体每瓶用       ml缓冲液稀释
        本月药盒标记每瓶用       ml缓冲液稀本  
        月分离剂使用前充分混匀(不可冰冻)。         
         2、测兔标本时,应改用25%PEG  500ul/管 分离。同时向 NSB、S0 S1~S5
            加Υ球蛋白液100ul/管;U、U0管加缓冲液100ul/管。
       
 
测定方法:本实验采用非平衡法,取聚苯乙烯编号,按下表操作。
                           NT ­ RIA  操作程序(单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂      T     NSB     S0      S1~S5    样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    300     200     ——      ——
               标 准 品    ——    ——    ——    200       ——
               样    品    ——    ——    ——    ——      200
               抗    体    ——    ——    100     100       100    
             ————————————————————————————
                            摇匀,4℃  24小时
             ————————————————————————————             
               125I-NT      100     100     100     100       100    
             ————————————————————————————   
                            摇匀,4℃  24小时  
             ————————————————————————————
              分 离 剂     ——     500    500     500      500
             ————————————————————————————
    混匀,室温放置20分钟,3500转/分 离心25 分钟,去上清,测定各管沉淀cpm值。
 结果计算:
      以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在半
 对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
     本试剂盒主要技术参数:
     NSB:<5%
     灵敏度:10pg/ml。
     可测范围:20~1620 pg/ml。
     精密度:批内CVW<10%,批间CVb<15% 。       
     特异性:本抗体与ET
、CGRP、NPY、MTL、BGP、CCK等均无交叉反应。
     正常参考值:血浆提取测定:66.19±28.68 pg/ml;
                 血浆直接测定:74.30±30.55 pg/ml。                
     本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
           T       NSB       S0            S1        S2           S3        S4         S5      
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————
       
生产日期:
有效日期;
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