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神经肽Y放免药盒操作说明书
                                                               NPYHY-10170 RIA   KIT
 
      神经肽Y(Neuropetide  NPY)是一种含有36个氨基酸残基的多肽。广泛分布于哺乳动物的中枢神经系统。NPY可收缩血管,升高血压,对心脏表现为负性肌力作用。最近有作者证实血小板有合成NPY的能力。NPY含量与应激反应程度有关,当出血性休克时,NPY释放增加对维持全身血压稳定和调节器官血流量具有重要的代偿作用。研究各种病理状态血浆及血小板NPY含量与释放的改变及其病理生理意义,对心脑血管疾病的防治具有广阔的研究前景。
测定盒组成
     1、缓冲液一瓶。      
     2、分离剂(第二抗体)一瓶。
     3、NPY  抗体一瓶,用前加    ml缓冲液稀释。
     4、NPY标记一瓶,用前加     ml缓冲液稀释。
     5、NPY标准品五瓶:用前每瓶加   ml缓冲液稀释33、100、300、600、1200pg/ml。
   6、抑肽酶一瓶。
     7、10%EDTA.Na2一瓶。
样品收集:
     1、取静脉血3ml注入含10%EDTA.Na2  40ul和抑肽酶10ul(含100U/ml以上)的试管中,混匀4℃,3000转/分 离心10分钟,分离血浆(溶血样品影响测定结果)。如需要可分装2-3份保存,放-20℃可保存2个月,在-70℃以下可存放半年。 测定前,使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃,3000转/分 离心5分钟,取上清测定。
 
    2、组织样品的处理:取出活组织,吸去血迹,称重,放入0.2mol/L 1N HAC 1ml中,然后在100℃水浴中煮沸10分钟,匀浆。4℃,3000转/分 离心15分钟,取上清放-20℃以下保存,测定时用PBS五倍以上稀释,以调节PH值。另外,每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标本最单独做一个U0。取组织的重量视不同组织而异。
    3、血浆样品处理:实验结果发现:有少数患者可能由于使用某些药物或个体差异,出现血浆蛋白对抗原抗体反应的影响,测定NPY值偏低,甚至为零。为排除样品中蛋白质的干扰,可采用简易酸性乙醇提取法,
    具体步骤如下:
取血浆0.5ml+1ml酸性无水乙醇( 100ml无水乙醇+冰乙酸1.2ml),放振荡器上振荡1min,4℃,3500rpm/15min  离心15min,将上清液倒入青霉素瓶,在45℃水浴锅上蒸干(可将水浴锅温度调到80℃左右,锅口上放一铝板,铝板上温度约40~45℃,将青霉素瓶置于铝板之上),大约需24小时样品可以完全干燥,干燥后将青霉素瓶加盖,封口,放-20℃保存。
    测定前,每瓶加PH7.4 PBS 0.5ml溶解,混匀,倒入塑料管中,放-20℃ 4h以上至样品完全冻结,然后取出放置4℃完全溶解,取上清200ul测定用。
注:从4℃取出后,一定要轻拿轻放,千万不要再振荡混匀,不要在室温放置过久,最好现加现取。
 
测定方法:本实验采用非平衡法,取聚苯乙烯编号,按下表操作。
                         NPY ­ RIA  操作程序(单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂      T     NSB     S0     S1~S5    样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    300     200    ——     ——
               标 准 品    ——    ——    ——    200     ——
               样    品    ——    ——    ——   ——      200
               抗    体    ——    ——     100    100      100    
             ————————————————————————————
                            摇匀,4℃  48小时
             ————————————————————————————             
               125I-NPY      100      100     100    100      100    
             ————————————————————————————   
                            摇匀,4℃  24小时
             ————————————————————————————
               分 离 剂    ——     500    500     500     500
             ————————————————————————————
      混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心25分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
   结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。            
        注:测兔标本时,应改用20%PEG500ul/管 分离。同时向 NSB、S0 S1~S5
             加Υ球蛋白液100ul/管;U、U0管加缓冲液100ul/管。
   本试剂盒主要技术参数:
     特异性:抗血清与7种常见的多肽类化合物的交叉反应<1%。
     灵敏度:<33pg/ml。可测范围:33~1200 pg/ml。
     精密度:批内CVW<10%,批间CVb<15% 。   
     有效期:本药盒4~8℃,保存有效期35天。  
     正常参考值:145.1±44.1 pg/ml。           
   本月药盒参考数据:
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           T       NSB       S0            S1        S2           S3         S4         S5   
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————
   
生产日期:
有效日期;
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