生长抑素放免药盒操作说明书
S.S（HY-10172）RIA KIT
生长抑素（Somatostatin S.S）为脑肠肽，具有广泛的生理作用。本药盒用于血浆提取液，组织提取液和脑脊液中S.S含量的测定。请认真阅读说明书并严格实行。
药盒组成及配制：冻干品-20℃保存，一经溶解应避免反复冻融。液体试剂4℃保存。
1、缓冲液1瓶。
2、免疫分离剂（第二抗体）1瓶。
3、标准品2瓶，浓度为2560pg/瓶，一瓶用做标准曲线，一瓶用做回收试验。
4、125I - S.S 2瓶，用前每瓶加缓冲液 ml溶解。
5、S.S抗体2瓶，用前每瓶加缓冲液 ml溶解
6、去激素血浆1瓶。
7、牛血清白蛋白（BSA）：0.2g。
8、EDTA-Na2，抑肽酶：自备。
9、生理盐水（含0.2%BSA），自备。用于复溶血浆提取样本。
血浆标本的收集：
1、静脉血2ml ，置于4℃预冷的试管内，每个试管含水量10% EDTA-Na2 30ul
及抑肽酶500KIU/ 40 ul。（我公司可提供抑肽酶160元/瓶）
1、 低温离心，1500g×15分钟。
2、 将血浆标本按0.5ml/管分装于玻璃试管中，-20℃贮存备测（可贮存3个月）。
血浆样本的提取：
1、于0.5ml血浆中加入50ul冰醋酸，混匀，逐滴加入2ml 4℃预冷丙酮，边滴边摇，
最后在旋转混匀器上混匀，提取管（瓶）不能用塑料管（瓶）！！！。。
2、4℃ 离心1500g×15分钟。
3、将上清液倒入16×100mm玻璃试管（或西林瓶）中。 沉渣中加入80%4℃预冷丙酮1ml
（80ml 丙酮加20ml蒸馏水）。摇匀后，再次离心1500g×10分钟。
4、合并两次上清液，加蒸馏水0.5ml，乙酸乙酯-乙醚合液（3：1 V/V）3ml，加塞，上下震摇约50次。静置或离心分层，吸去上层有机溶剂，保留水相（注意勿吸去水溶液，可保留少量乙酸乙酯乙醚液）。
5、将水溶液管（瓶）置凉风下（空调或电扇）将有机溶剂吹掉后所余液体用冷冻抽干机抽干。若无冷冻抽干机亦可于40℃水浴中，用氮气或压缩空气吹干。干燥后可密封置4℃冰箱保存，备一周内测定（或-20℃保存2—3个月）
组织的提取：
取适宜大小的组织快，立即称重后于煮沸的生理盐水（1-2ml）中煮沸3分钟，冷却后加1N冰醋酸0.5ml于匀浆器中制成匀浆，再用1N NaOH 0.5ml中和，离心3500转/分，20分钟（最好是低温离心）取上清液贮存于-20℃以下待测（样本可保存2—6个月）。
回收试验：
1．取S.S标准一瓶，加缓冲液1 ml稀释，浓度度为2560，然后倍比稀释成浓度为1280、
640、320pg/ml。
2．回收管：取试管3支，分别加入浓度为640、1280、2560 pg/ml的S.S标准液0.1ml，
于每管中加去激素人血浆0.5ml混合，按血浆标本提取法（1~6）与标本管同时进
行提取。
放免分析：
1、自冰箱取出吹干的标本管，回收管，加入生理盐水0.5ml/管（含0.2%BSA）重新溶解
（组织提取直接进行）。
2、 S.S 标准1瓶每瓶加1 ml缓冲液稀释成浓度为5120 pg/ml，然后倍比稀释成浓度为
1280、640、320、160、80、40、20、10pg/ml，共8管。
3、 操作步骤： （双管重复测定）
S.S RIA 加液程序 （单位：ul ）
————————————————————————————————
试 剂 T NSB B0 S1~S8 回收管 样本管
————————————————————————————————
标本提取液 —— —— —— —— —— 200
回收管提取液 —— —— —— —— 200 ——
缓 冲 液 —— 400 300 200 100 100
标 准 品 —— —— —— 100 —— ——
抗 体 —— —— 100 100 100 100
———————————————————————————————
充分混匀，4℃ 放置24小时
———————————————————————————————
125I- S.S 100 100 100 100 100 100
———————————————————————————————
摇匀4℃ 温育48小时
———————————————————————————————
分 离 剂 —— 600 600 600 600 600
———————————————————————————————
混匀，室温放置15分钟后，3500转20转/分4~10℃离心，弃上清。测定沉淀cpm数。
结果计算：
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，
在半 对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
回收率= 回收管含量实测值×2.5 ÷回收时加入的S.S含量 × 100%
标本S.S浓度（pg/ml）=标准管测值÷2÷回收率。其中“2”为容积校正系数。
标本S.S正常参考值：空腹10.1±7.2pg/ml(X±SD).正常人≤30pg∕ml
本月药盒参考数据：
—————————————————————————————————————————
T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
—————————————————————————————————————————
CPM
—————————————————————————————————————————
N/T% B0/T% B/ B0 %
—————————————————————————————————————————
生产日期：
有效日期：
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
免费电话：8008109828
邮 编： 100085
电 话：（010）88114651 (010) 56146198
传 真：（010）88112680
网址：www.sinoukbio.com
E-Mail:sinouk@163.com
QQ客服：1749417768
