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生长抑素放免药盒操作说明书
                                                                    S.SHY-10172RIA  KIT     
 
       生长抑素(Somatostatin S.S)为脑肠肽,具有广泛的生理作用。本药盒用于血浆提取液,组织提取液和脑脊液中S.S含量的测定。请认真阅读说明书并严格实行。
   
  药盒组成及配制:冻干品-20℃保存,一经溶解应避免反复冻融。液体试剂4℃保存。
  1、缓冲液1瓶。
  2、免疫分离剂(第二抗体)1瓶。
  3、标准品2瓶,浓度为2560pg/瓶,一瓶用做标准曲线,一瓶用做回收试验。
  4、125I - S.S  2瓶,用前每瓶加缓冲液    ml溶解。
  5、S.S抗体2瓶,用前每瓶加缓冲液     ml溶解
  6、去激素血浆1瓶。
  7、牛血清白蛋白(BSA):0.2g。
  8、EDTA-Na2,抑肽酶:自备。
  9、生理盐水(含0.2%BSA),自备。用于复溶血浆提取样本。
   
  血浆标本的收集:
  1、静脉血2ml ,置于4℃预冷的试管内,每个试管含水量10% EDTA-Na2  30ul
     及抑肽酶500KIU/ 40 ul。(我公司可提供抑肽酶160元/瓶)
1、  低温离心,1500g×15分钟。
2、  将血浆标本按0.5ml/管分装于玻璃试管中,-20℃贮存备测(可贮存3个月)。
   
  血浆样本的提取
 1、于0.5ml血浆中加入50ul冰醋酸,混匀,逐滴加入2ml 4℃预冷丙酮,边滴边摇,  
     最后在旋转混匀器上混匀,提取管(瓶)不能用塑料管(瓶)!!!。。
 2、4℃ 离心1500g×15分钟。
 3、将上清液倒入16×100mm玻璃试管(或西林瓶)中。 沉渣中加入80%4℃预冷丙酮1ml
    (80ml 丙酮加20ml蒸馏水)。摇匀后,再次离心1500g×10分钟。
 4、合并两次上清液,加蒸馏水0.5ml,乙酸乙酯-乙醚合液(3:1  V/V)3ml,加塞,上下震摇约50次。静置或离心分层,吸去上层有机溶剂,保留水相(注意勿吸去水溶液,可保留少量乙酸乙酯乙醚液)。
 5、将水溶液管(瓶)置凉风下(空调或电扇)将有机溶剂吹掉后所余液体用冷冻抽干机抽干。若无冷冻抽干机亦可于40℃水浴中,用氮气或压缩空气吹干。干燥后可密封置4℃冰箱保存,备一周内测定(或-20℃保存2­—3个月)
   
 组织的提取:
  取适宜大小的组织快,立即称重后于煮沸的生理盐水(1-2ml)中煮沸3分钟,冷却后加1N冰醋酸0.5ml于匀浆器中制成匀浆,再用1N NaOH 0.5ml中和,离心3500转/分,20分钟(最好是低温离心)取上清液贮存于-20℃以下待测(样本可保存2—6个月)。
   
回收试验
     1.取S.S标准一瓶,加缓冲液1 ml稀释,浓度度为2560,然后倍比稀释成浓度为1280、
       640、320pg/ml。
     2.回收管:取试管3支,分别加入浓度为640、1280、2560 pg/ml的S.S标准液0.1ml,
   于每管中加去激素人血浆0.5ml混合,按血浆标本提取法(1~6)与标本管同时进
   行提取。
 
放免分析
1、自冰箱取出吹干的标本管,回收管,加入生理盐水0.5ml/管(含0.2%BSA)重新溶解
  (组织提取直接进行)。
  2、 S.S 标准1瓶每瓶加1 ml缓冲液稀释成浓度为5120 pg/ml,然后倍比稀释成浓度为
     1280、640、320、160、80、40、20、10pg/ml,共8管。
  3、 操作步骤:  (双管重复测定)            
                   S.S    RIA    加液程序              (单位:ul )                                                                                                                                                
       ————————————————————————————————
          试   剂      T     NSB       B0      S1~S8    回收管   样本管
       ————————————————————————————————
         标本提取液   ——    ——     ——     ——    ——     200
        回收管提取液  ——    ——     ——     ——    200      ——
          缓 冲 液    ——     400     300      200     100      100
          标 准 品    ——    ——    ——      100     ——     ——
          抗    体    ——    ——     100      100     100      100
        ———————————————————————————————
                        充分混匀,4℃ 放置24小时
        ———————————————————————————————
          125I- S.S    100     100      100      100      100      100
        ———————————————————————————————
                        摇匀4℃ 温育48小时
        ———————————————————————————————
          分 离 剂   ——    600      600      600      600      600
        ———————————————————————————————
   混匀,室温放置15分钟后,3500转20转/分4~10℃离心,弃上清。测定沉淀cpm数。
    结果计算:
     以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半 对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。                 
    回收率= 回收管含量实测值×2.5 ÷回收时加入的S.S含量 × 100%                
   标本S.S浓度(pg/ml)=标准管测值÷2÷回收率。其中“2”为容积校正系数。
   标本S.S正常参考值:空腹10.1±7.2pg/ml(X±SD).正常人≤30pg∕ml
  本月药盒参考数据:
   —————————————————————————————————————————
           T       NSB       S0          S1    S2      S3    S   S5    S6    S7    S8
    —————————————————————————————————————————
    CPM
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             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————
        生产日期:
       有效日期:
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