尾加压素免疫试剂盒说明书
UrotensinⅡ （HY-10173） RIA KIT
尾加压素（UrotensinⅡ UⅡ）又称硬骨鱼紧张肽Ⅱ，是迄今发现人体内最强的缩血管活性肽，能刺激血管平滑肌细胞增殖。作为一种环形结构调节肽，由十一个氨基酸组成，分子量为1388Da。最初从鱼的脊椎尾部下垂体中分离出来，UⅡ受体是一种孤儿性G蛋白偶联受体GRP14 ，其主要分布在心血管组织中，在肺部及神经系统亦有分布，最近研究发现，在人体内存在UⅡ除神经组织外，血管尤其是粥样硬化的脂质沉着区富含UⅡ。在正常人肾组织中UⅡ主要存在于肾小管和集合管上皮细胞内，尤其以远曲小管最为明显，Shenouda等总结认为，在正常人肾脏和肾癌中有丰富的UⅡ表达，这项研究表明：具有血管活性和介导生长作用的肽类UⅡ参与了人类肾脏系统的病理生理过程。体外实验表明：UⅡ可使大鼠心主动脉收缩；是猕猴体内最强的血管收缩剂。有报道在人类第三号染色体短臂上首次定位了与中国人Ⅱ型糖尿病遗传易感性连锁的基因区发现UⅡ基因的一个遗传变异与Ⅱ型糖尿病相关，并且很有可能是Ⅱ型糖尿病相关基因中致病基因之一。
标本采集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。测定前，血浆标本实验时推荐过C18拄。
该药盒主要应用范围：
² 心脑血管疾病研究
² Ⅱ型糖尿病研究
² 内分泌系统、神经系统研究
药盒组成：
1、UⅡ标记一瓶 。 2、UⅡ抗体一瓶。
3、缓冲液一瓶。 4、分离剂（第二抗体）一瓶。
１、 UⅡ标准品8瓶：1、2、4、8 、16、32、64、128pmol/L。
测定方法：
UrotensinII RIA 操作程序 单位：ul
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试 剂 T NSB S0 S1~ S6 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
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混匀，4℃ 保温24小时
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125I-UⅡ 100 100 100 100 100
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混匀，4℃ 保温24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀，室温静置90分钟，3500转/分 离心15分钟，去上清，测沉淀CPM。
结果计算：
以N/T、B/T计算NSB，S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，
在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项：
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月标准品每瓶用 ml去激素血清稀释
本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）
附：血浆标本在实验时最好过柱，其步骤：
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分 离心20分钟，取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。
7、取干燥后的西林瓶用250 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实
验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
8、结果计算：最终浓度×5.0
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种试剂（或材料）。
正常参考值：2.01±0.45pmol/L(n=50)
本月药盒参考数据：
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期：
有效日期：
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备注：该说明书由英国皇家医学院研究生院内分泌部《UⅡ药盒操作说明书》翻译而来。
Department of Endocrinology Royal Postgraduate Medical School
