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尾加压素免疫试剂盒说明书
           UrotensinHY-10173 RIA  KIT
 
      尾加压素(UrotensinⅡ UⅡ)又称硬骨鱼紧张肽Ⅱ,是迄今发现人体内最强的缩血管活性肽,能刺激血管平滑肌细胞增殖。作为一种环形结构调节肽,由十一个氨基酸组成,分子量为1388Da。最初从鱼的脊椎尾部下垂体中分离出来,UⅡ受体是一种孤儿性G蛋白偶联受体GRP14 ,其主要分布在心血管组织中,在肺部及神经系统亦有分布,最近研究发现,在人体内存在UⅡ除神经组织外,血管尤其是粥样硬化的脂质沉着区富含UⅡ。在正常人肾组织中UⅡ主要存在于肾小管和集合管上皮细胞内,尤其以远曲小管最为明显,Shenouda等总结认为,在正常人肾脏和肾癌中有丰富的UⅡ表达,这项研究表明:具有血管活性和介导生长作用的肽类UⅡ参与了人类肾脏系统的病理生理过程。体外实验表明:UⅡ可使大鼠心主动脉收缩;是猕猴体内最强的血管收缩剂。有报道在人类第三号染色体短臂上首次定位了与中国人Ⅱ型糖尿病遗传易感性连锁的基因区发现UⅡ基因的一个遗传变异与Ⅱ型糖尿病相关,并且很有可能是Ⅱ型糖尿病相关基因中致病基因之一。
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。测定前,血浆标本实验时推荐过C18拄。
该药盒主要应用范围:
²        心脑血管疾病研究
²        Ⅱ型糖尿病研究
²         内分泌系统、神经系统研究
药盒组成:
1、UⅡ标记一瓶 。  2、UⅡ抗体一瓶。
3、缓冲液一瓶。 4、分离剂(第二抗体)一瓶。
1、   UⅡ标准品8瓶:1、2、4、8 、16、32、64、128pmol/L。
测定方法:             
                    UrotensinII  RIA  操作程序       单位:ul
             ————————————————————————————
               试   剂      T     NSB      S0     S1~ S6     样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    200     100      ——       ——
               标 准 品    ——    ——    ——     100        ——
               样    品    ——    ——    ——     ­——       100
               抗    体    ——    ——     100      100       100
             ————————————————————————————
                              混匀,4℃ 保温24小时
             ————————————————————————————
             125I-UⅡ    100      100      100      100       100
            ————————————————————————————
                              混匀,4℃ 保温24小时
            ————————————————————————————
                分 离 剂   ——    500      500      500       500
            ————————————————————————————
       混匀,室温静置90分钟,3500转/分 离心15分钟,去上清,测沉淀CPM。
 
 
 结果计算
    以N/T、B/T计算NSB,S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
  注意事项:
      本月药盒抗体每瓶用          ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用          ml缓冲液稀释
  本月标准品每瓶用            ml去激素血清稀释      
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
附:血浆标本在实验时最好过柱,其步骤:
   1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
   2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
      衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
   3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
   4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
   5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
   6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
   7、取干燥后的西林瓶用250 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实
      验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
    8、结果计算:最终浓度×5.0
     Sep-Pak C-18: Waters.inc.   Massachusetts.USA     TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种试剂(或材料)。
 
  正常参考值:2.01±0.45pmol/L(n=50)
  本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
           T       NSB      S0             S1       S2        S3       S4        S5     
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————
              
      生产日期:
      有效日期:
    
     
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     备注:该说明书由英国皇家医学院研究生院内分泌部《UⅡ药盒操作说明书》翻译而来。
            Department of  Endocrinology  Royal  Postgraduate Medical School   
 
 
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