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                    α-促黑素细胞刺激素药盒操作说明书
           α-MSH (HY-10218)RIA  KIT
 
     促黑素细胞刺激素(α-Melanocyte Stimalating Hormoneα-MSH)是一种内源性的神经调节肽,人类垂体细胞及许多垂体外细胞都可产生。通过与其受体结合发挥作用。在生理状态下,αMSH在体内的浓度非常低,变化范围小。当机体产生炎症时,αMSH在血桨中浓度增高,αMSH具有强有力的抗炎免疫调节能力,抑制前炎症细胞因子的生成及活性,使巨噬细胞合成一氧化氮减少,抑制中性粒细胞的趋化性,调整前列腺素的合成,促进抗生细胞因子IL-10的合成。
药盒组成:
1、  125I-αMSH(冻干品) 1  瓶。
2、  αMSH抗体(冻干品) 1  瓶
3、标准品β-EP(冻干品)6瓶,浓度分别为0、0.5、1、2、4、8ng/ml。
      4、分离剂(第二抗体)一瓶。
      5、缓冲液1瓶。
   实验步骤:
1、取组织(米粒大小),立即称重后加到1ml 100℃生理盐水中煮沸5分钟后迅速冷却,再加0.5ml 1N醋酸制成匀浆,置4℃ 1-2小时后离心2000 G 15分钟,取上清,冷冻干燥后用RIA缓冲液复溶,进行RIA测定。或煮沸迅速冷却后用0.1N盐酸制成匀浆,置4℃1-2小时后再用0.1N NaOH中和,离心取上清液-20℃保存待测。
2、测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                        α-MSH  RIA  加样程序         单位:ul
            ─────────────────────────────
                试  剂      T      NSB      S0       S1—S5      标 本        
            ─────────────────────────────
               缓 冲 液    ——      200     100      ——        ——   
              MSH 标 准    ——      ——      ——      100        —— 
              标        本    ——      ——      ——      ——        200
               抗        体    ——      ——      ——      ——        100
                ─────────────────────────────
                              4℃   放置24小时
            ─────────────────────────────
  
             125I-α-MSH    100       100     100      100        100  
            ─────────────────────────────
                              4℃   放置24小时
            ─────────────────────────────
              分 离 剂     500     500     500      500       500 
            ─────────────────────────────
           振荡3分钟,3000转/分 离心 15分钟,弃上清,测沉淀计数cpm。
 
结果计算:
        以N/T、B/T计算NBS、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,
    在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序,直
    接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
 
注意事项:
   
    本月标准品每瓶用            ml缓冲液稀释   
    本月药盒抗体每瓶用          ml缓冲液稀释
        本月药盒标记每瓶用          ml缓冲液稀释    
        本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
 
    正常参考值:0.6~1.2ng/ml
  本药盒技术参数:
  
        ——————————————————————————————————————
               T     NSB      S0           S1    S2     S3       S  S5    S6    S7    s8
         ——————————————————————————————————————
         CPM
         ——————————————————————————————————————
                N/T%        B0/T%        B/ B0 %  
         ——————————————————————————————————————
    
         
         
      生产日期:
      有效日期:
 
    
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