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                                                                                                     科研药盒中,慎用于临床               
              脑钠素放免药盒操作说明书
                                   BNP(HY-139) RIA  KIT
    脑钠素(Brain natriuretic peptide BNP)是1988年日本学者Stdoh等首先从猪脑分离纯化的一种新的利钠多肽,由32个氨基酸组成,分子量为3462.07。目前研究表明:促进排钠、排尿,具有较强的舒张血管作用,可对抗肾素—血管紧张素—醛固酮系统的缩血管作用,是人体抵御容量负荷过重及高血压的一个主要内分泌系统。因此,临床BNP作为一种生物学检测指标,对心血管系统的病理生殖、血压调节、体液平衡及心血管功能的研究越来越重要
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1、B NP 标记二瓶;两瓶混匀后使用。 2、BNP抗体二瓶;   3、缓冲液一瓶;
4、PR分离剂(第二抗体)一瓶;  5、10%EDTA . Na2一瓶;  6、抑肽酶一瓶;         
7、BNP 标准品5瓶:浓度分别分别为4、8、16、32、64、128pg/ml;
8、标准稀释液一瓶。
样品收集:
1、 取空腹静脉血2ml注入含有10%EDTA . Na2 30ul和抑肽酶10ul(含100U/ml以上)试管中,混匀立即放4℃ 3000rpm/ min 离心10min,分离血浆,如需要可分成2-3份,-20℃保存2个月。-70℃以下可保存半年。测定前,将样品于室温或冷水中复融,再次4℃3000 rpm/ min 离心15min取上清测定。
2.组织样品的处理: 
  取出活组织,吸去血迹,称取30-50mg,尽快放入0.2mol/L HAC,略作碾磨,然后放100℃水浴中煮沸10分钟,制成匀浆,4℃3000 rpm/ min离心15min取上清测定-20℃以下保存。测定时用0.2mol/L pH 7.4 PBS 5倍以上稀释。以调节pH值。
注:如组织样品含量太低,不需稀释时应将每份组织标本调节pH值为pH 6.5-7.0,
4℃3000rpm/ min 离心15min取上清测定。另外每种组织非特异结合(U0)可能有差异,每份标本最好单独做一个U0,取组织的重量视不同组织而异。
测定方法:
                            BNP  RIA  操作程序     (单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂       T      NSB     S0     S1~S5      样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液  ——     200     100     ——       ——
               标 准 品  ——    ——     ——     100        ——
               样    品    ——     ——     ——     ——       100
               抗    体    ——     ——      100     100        100  
             ————————————————————————————
                              充分混匀,4℃  24小时
             ————————————————————————————                                               
           125I-¬BNP    100      100     100     100       100              
             ————————————————————————————                   
                              充分混匀,4℃  24小时
             ————————————————————————————
               分 离 剂   ——      500     500     500       500
             ————————————————————————————
       混匀室温放置20分钟,3500 转/分 4℃ 离心20 分钟,去上清,测定沉淀cpm值。

  结果计算:
        以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在
    半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
   注意事项:
     1. 本月每瓶标准品用             ml缓冲液稀释;
            本月药盒抗体每瓶用           ml缓冲液稀释   
            本月药盒标记每瓶用           ml缓冲液稀释    
             本月PR试剂在使用前充分混匀(不可冰冻)。     
      2.测定兔标本时,应改用20%PEG  500ul/管 分离;同时,NSB、S0~S5管补加正常 人
           血清100ul/管(或r-球蛋白100 ul/管),U0 、U管补加PBS 100ul/管。
   本试剂盒主要技术参数:
      1、 NSB:<5%。
      2、 标准曲线范围:4~128 pg/ml。
      3、灵敏度:<0.4pg/ml。
      4、精密度:批内CV7.7%,批间CV11.5% 。    
      5、特异性:本抗体与生长抑素,β-内啡肽及P-物质等多肽均无交叉反应。
      6、 正常参考值:15-45pg/ml。
      7、本药盒有效期为一个月。
      8、标准品在使用前配制。
      9、 用户如遇特殊情况,收到试剂盒后不能在有效期内使用,除标记品外,请您将标准品、抗血清冷冻保存,缓冲液、分离剂4℃保存,待下次只购一瓶标记即可。
      10、 10%EDTA二钠室温保存,若出现沉淀,加热即可溶解
  本次药盒参考数据:    
             ——————————————————————————————
                    T     NSB     S0           S1     S2   S3     S4    S5    
             ——————————————————————————————
              CPM
             ——————————————————————————————
                      N/T%      B0/T%      B/ B0 %
             ——————————————————————————————   
        生产日期:
        有效日期:
        有效日期:
 
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