人血管内皮生长因子（VEGF）定量EIA试剂盒使用说明书
VEGF(HY-10139)
原理：
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人血管内皮生长因子（VEGF）单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的血管内皮生长因子（VEGF）与单抗结合，加入生物素化的抗转化生长因子-血管内皮生长因子（VEGF）抗体，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显色，加终止液硫酸，颜色变深，在450nm处测OD值，血管内皮生长因子（VEGF）浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中血管内皮生长因子（VEGF）浓度。
试剂盒组成：
1、96孔微孔板：一块，已包被抗血管内皮生长因子（VEGF）单抗。
2、标本稀释液：五瓶
3、第一抗体工作液：一瓶（使用前用第一抗体稀释液稀释，当日使用）
4、第一抗体稀释液：一瓶
5、底物稀释液：一瓶
6、终止液：一瓶
7、洗涤液（20 ×）一瓶
8、标准品（冻干粉，2000ng/mL）：二管
9、酶标抗体浓缩液；一支（使用前用酶标抗体稀释液稀释，当日使用）
10、酶标抗体释释液一瓶
11、坐标纸：一张
准备试剂与收集血样：
1、洗涤液：用重蒸水1：20稀释；
2、收集血液标本：采集血清或血浆、细胞培养液等尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须
冷冻（-20℃）保存，避免反复冻融。
3、标准品液配制：使用前每管中加入蒸馏水lml溶解后即可。
检测程序：
1、标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入标本100ul，第一孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100ul弃去，使之体积均为100ul。第八孔为空白对照。
2、加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul。
3、将反应板充分混匀后置37℃ 120分钟。
4、洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
5、每孔中加入第一抗体工作液100ul。
6、将反应板置37℃ 120分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul。将反应板置37℃ 60分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15-20分钟。每孔加入1滴终止液混匀。在450nm处测吸光值。
结果计算与判断：
1、有OD值都应减除空白值后再行计算。
2、以标准品500、250、125、62.5、31.25、15.625ng/mL的OD值在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3、样品OD值在该曲线图上查出相应血管内皮生长因子（VEGF）含量。
注意事项：
1、标准孔及待查样品均建议做复孔，每次测定应同时制作标准曲线。
2、本试剂盒宜4℃冰箱保存。
3、本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用，溶液应轻轻摇匀后使用。
4、本试剂盒含2M硫酸，不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5、板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
6、正常参考值：85.1±25.6 ng/ml
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