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可溶性瘦素受体定量EIA试剂盒使用说明书
                                                             SLEPR(HY-10182)
原理:
   本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人可溶性瘦素受体单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的可溶性瘦素受体与单抗结合,加入生物素化的抗可溶性瘦素受体抗体,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显色,加终止液硫酸,颜色变深,在450nm处测OD值,可溶性瘦素受体浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中可溶性瘦素受体浓度。
 
试剂盒组成:
1、96孔微孔板:一块,已包被抗可溶性瘦素受体单抗。
2、标本稀释液:1瓶
3、第一抗体工作液:一瓶(使用前用第一抗体稀释液稀释,当日使用)
4、第一抗体稀释液:一瓶
5、底物稀释液:一瓶
6、终止液:一瓶
7、洗涤液(20 ×)一瓶
8、标准品(冻干粉,300ng/mL):二管
9、酶标抗体浓缩液;一支(使用前用酶标抗体稀释液稀释,当日使用)
10、酶标抗体释释液一瓶
11、坐标纸:一张
 
准备试剂与收集血样:
1、洗涤液:用重蒸水1:20稀释;
2、收集血液标本:采集血清或血浆、细胞培养液等尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃)保存,避免反复冻融。
3、标准品液配制:使用前每管中加入蒸馏水lml溶解后即可。
 
检测程序:
1、标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入标本100ul,第一孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第七孔,最后,从第七孔中吸出100ul弃去,使之体积均为100ul。第八孔为空白对照。
2、加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul。
3、将反应板充分混匀后置37℃ 120分钟。
4、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
5、每孔中加入第一抗体工作液100ul。
6、将反应板置37℃ 120分钟。洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul。将反应板置37℃ 60分钟。洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15-20分钟。每孔加入1滴终止液混匀。在450nm处测吸光值。
 
 
 
 
结果计算与判断:
 
1、有OD值都应减除空白值后再行计算。
2、以标准品300、150、75、37.5、18.25、9.125的OD值在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3、样品OD值在该曲线图上查出相应可溶性瘦素受体含量。
 
注意事项:
1、标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定应同时制作标准曲线。
2、本试剂盒宜4℃冰箱保存。
3、本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。
4、本试剂盒含2M硫酸,不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5、板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
6、正常参考值:35.29±6.25 ng/ml
 
药盒厂家:美国R&D公司(进口分装)。
 
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