1．  二硫苏糖醇试剂（DTT0，代码：06B229253）

1瓶，大于10mL，拧紧瓶盖放在冰箱内2～8℃冷存。

2．  VB12/叶酸标记物，代码：06B257133

1瓶，大于10mL，其中VB12用CO-57标记，放在冰箱内2～8℃避光冷存。

3．  粘合剂，代码：06B257150

1瓶，大于100mL，用前摇匀，放在冰箱内2～8℃冷存。

4．  VB12/叶酸标零标准，代码：06B254975

1瓶，大于8mL，放在冰箱内2～8℃冷存。

5．  VB12/叶酸标准品A～F，共6瓶，放在冰箱内2～8℃避光冷存。

 

6．  提取剂，代码：06B257176

1瓶，大于10mL，放在冰箱内2～8℃冷存。

如果在30天之内用完一瓶标记物，就把一并DTT试剂加入到这一瓶标记物中，配置后30天之内用完，放在冰箱内2～8℃冷存。

如果在30天之内用不完，把标记物和DTT试剂分成若干等份，每次用前按1：1的比例配置成标记物/DTT溶液。

样品应取空腹血。

如果需要血清，在封闭的试管内室温下放置30～60分钟，离心后取出血清，若要血浆须将样品加入放有EDTA的试管内，离心后取得EDTA血浆。

红细胞叶酸分析要用抗凝全血。把血放在有DETA的7ml的玻璃管内，确定并记录血细胞比容值。把100 uL血加入到2mL新配制的0.2%抗坏血酸溶液内，进行1：21稀释，摇匀，不要有泡沫。用前把该溶血避光在20～25℃放置60～90分钟。

如果样品在4小时内使用，放在冰箱内2～8℃冷存，如果超过4小时，应放在-20℃以下冷存，

可存放6～8星期，避免反复冻溶。

使用和分析过程中尽量避光。如果计数仪是双道或多道的，可用一道测量I-125，另一道测量Co-57。如果是单道的，则所有管子应测量两次，一次设置测量VB12的Co-57,另一次设置来测量叶酸中的I-125。

1．  按下列次序成对排列试管：总计数，标准0、A、B、C、D、E、F病人样品。

2．  向0管和A管内加入200微升A标准，向相应的试管内各加入B～F标准及病人样品200微升。

3．  向所有管子加入配置好的标记物/DTT溶液200微升。

4．  搅拌均匀，将所有管子在室温下温育15分钟。

5．  向（不包括总T管）所有管子加入100微升提取剂。

6．  搅拌均匀，把所有管子在室温下温育10分钟。

7．  向0管内加入1000微升0标准。

8．  向（不包括总T管和0管）所有管子加入1000微升粘合剂。

9．  搅拌均匀并在室温下温育60分钟。

10．              离心10分钟，倾倒上清液（总T管除外）。

11．              对每个管子的放射性进行计数。（测两次，1-125和Co-57）。

1．  计算0管及每项的平均数。

 

               标准A的平均CPM—0管的平均CPM

2．B0(100%)=  ——————————————————  × 100

总T管的平均CPM—0管的平均CPM

 

 

                   标准品或病人的修正的CPM

B0(100%)=  ——————————————————  × 100

标准品A的修正的CPM

 

 

2．  用Logit—log坐标纸画出标准曲线，从而用内插法得到血清或血浆中的VB12或叶酸的浓度。

 

B红细胞叶酸：

1．  通过和以上同样的方法得到标准曲线从而得到溶血的叶酸浓度。

2．  得到的溶血的叶酸浓度值乘以21便是全血的叶酸浓度（ng/ml）。

3．  全血的叶酸浓度值除以血细胞比容值得到红细胞的叶酸浓度。

 

                      (ng/ml)  溶血×21

红细胞的(ng/ml)=  ———————————— × 100

     %血细胞比容/100