甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书
AFP(HY-013) RIA KIT
临床意义:
甲胎蛋白(AFP)是人血清α球蛋白,分子量为68000。在胎儿发育中,由卵黄囊和胎儿肝脏产生。出生后逐渐下降至正常水平,当发生原发性肝癌和胎儿重大畸型时,AFP水平增加很多。药盒对诊断肝癌具有专-性。另外测定母亲血液和胎儿羊水中AFP浓度可判断胎儿是否正常。本药盒采用放射免疫分析方法应用免疫分离剂,可测定血清、羊水、脐血中AFP的含量。
样品采集:
取晨空腹的静脉血,取血清,放4-8 C可保存一周,脂血样品影响测定结果。
药盒组成:
1、125I-AFP 1瓶。
2、AFP抗体 1瓶。
3、标准品 7瓶,即为0、10、20、50、100、200、400 ng/ml。
4、免疫分离剂(第二抗体) 1瓶。
操作方法:
试管编号,按下表程序操作。
AFP RIA 加样步骤 ( 单位: ul)
管 别 |
标准品 |
样品 |
125I-AFP |
抗血清 |
混匀,37℃温育3小时,任取三管测总T(CPM)。 |
分离剂 |
NSB管 |
200(S0) |
-- |
100 |
-- |
500 |
S0管 |
100 |
-- |
100 |
100 |
500 |
S1-S末管 |
100 |
-- |
100 |
100 |
500 |
样品管 |
-- |
100 |
100 |
100 |
500 |
混匀,室温放置15分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸弃上清液,测定各管沉淀的放射性计数(CPM)。
数据处理:
1、 计算机处理:建议函数模型采用三次多项式或log~logit法。
2、 计算、绘图法:
计算各管的百分率:以S0(cpm数)为B0,各标准管Si(cpm数)为Bi,求各管的百分结合率。
Bi Bi管(cpm)—NSB管(cpm)
— %= —————————————— ×100
B0 B0管(cpm)—NSB管(cpm)
(1)线性回归:用logX~logitY回归,求出r、a、b值,样品含量可由下式计算得出。
-a+logit Y
Log X= ————
b
(2)绘图法:用各标准点计算的结果,在log~logit坐标纸上绘制标准曲线图,未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
正常叁考值:
AFP<20ng/ml(20цg/L)。
正常人血清中AFP一般在(2~8)ng/ml,但由于许多疾病特别是肝炎都会影响血清中AFP的含量,因此AFP的正常值一般在20ng/ml以下,若被测血清中AFP浓度高,可用生理盐水进行稀释,测得的值乘以稀释倍数。
技术特性:
1、曲线范围:(10~400)ng/ml(10~400цg/L)。
2、灵敏度: < 2.5ng/ml(2.5цg/L)。
3、特异性:AFP抗血清与类似物的交叉反应合格。
4、精密度:批内CVw<6%,批间CVb<11%
保存及有效期:
药盒于(2~8)℃避光保存,切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
药盒参考数据:
指标 |
B/T(%) |
Bi/B0(%) |
项目 |
NSB |
S0 |
S1 |
S末 |
参数 |
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生产日期:
有效日期:
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