胰高血糖样多肽放射免疫分析药盒说明书
GLP（HY-10121） RIA KIT
胰高血糖样多肽（GLULAGON-LIKE PEPTIDE 7-36 GLP）是肠粘膜细胞所分泌的一种含30个氨基酸的多肽，分子量为3295，GLP是小肠制作前胰高血糖素的主要物质，由肠K细胞分泌到人体进行循环，并对摄食做出反应，GLP 通过CAMP受体调节，而促进胰岛素的分泌。本试剂盒利用液相竞争抑制原理，采用非平衡法对样品进行测定。待测样品或标准与限量的抗血清及标记原加在一起进行竞争性结合反应，反应完全后，加入免疫分离剂，分离出抗原－抗体复合物，测定复合物的放射性（B）,计算各标准管的结合率(B/B0%)。作出标准曲线，查出样品浓度。
该药盒主要应用范围：
* 糖尿病，血液病的研究
* 血液流变学的研究
* 与其他激素关系的研究
试剂盒组成：
1、GLP 标记一瓶；
2、GLP抗体一瓶；
3、GLP标准品1瓶，浓度为：256.0pmol/L,原液为256为第一标准品，然后用缓冲液倍比
稀释,其浓度为：128、64、32、16 pmol/L
4、缓冲液一瓶,
5、分离剂（第二抗体）一瓶。
标本收集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。
测定方法：（整个试验操作最好在冰浴中进行，否则容易失活）
GLP RIA 操作程序（单位：ul）
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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抑 肽 酶 —— —— 50 50 50
缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
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混匀，2～8℃温育24小时
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125I- GLP 100 100 100 100 100
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充分混匀，2～8℃温育20—24小时
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免疫沉淀剂 —— 500 500 500 500
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混匀，室温放置30分钟后，3500 转/分 离心15分钟，去上清，测沉淀cpm值。
结果计算：
以N/T、B/T计算NSB，S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，
在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项：
本月药盒抗体每瓶用 10 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 10.0 ml缓冲液稀释
本月标准品每瓶用 3.0 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）
测定前，血浆标本推荐过C18拄。
附：血浆标本过柱步骤：
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分 离心20分钟，取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。
7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种试剂（或材料）。
正常参考值：25.5±5.5pmol/L(n=30)
本月药盒参考数据：
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期：2008-09-25
有效日期：2008-10-30
生产批号：20080925
Department of Endocrinology Royal Postgraduate Medical School
英国皇家医学院内分泌部（抗原抗体原生产地）
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