大鼠
黑色素聚集激素(melanin-concentrating hormone MCH)ELISA
用途：
本试剂盒用于定量检测大鼠血清黑色素聚集激素(melanin-concentrating hormone MCH)的浓度。
原理：
本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗大鼠黑色素聚集激素抗体(一抗)包被于酶标板上，大鼠血清黑色素聚集激素会与黑色素聚集激素抗体结合，未结合的将被洗去。加入生物素化的抗黑色素聚集激素抗体（二抗），它将与结合在一抗上的黑色素聚集激素结合而形成免疫复合物。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。黑色素聚集激素浓度与OD(450nm)成正比。
试剂盒组成：
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酶标板(Coated Wells) |
96wells |
Anti-rat-pyr Biotin |
2 vials |
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浓缩洗涤液(100X)(Washing Concentrate) |
10ml |
标准品(Standards) |
1 vial |
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底物A(Color Reagent A) |
6ml |
底物B(Color Reagent B) |
6ml |
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终止液(Stop Solution) |
6ml |
酶联物（HRP） |
2 vials |
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酶联物稀释液(HRP/Biotin Diluent) |
15ml |
标准品稀释液(Standard Diluent) |
15ml |
保存： 贮藏于2-8°C。
样品： 在此检测中，可使用血清样品。
准备工作：
1. 浓缩洗涤液(100X)用双蒸水稀释成1X（至1000ml）。
2. 标准品40nmol/L的高浓度标准品。高浓度标准品可保存于-20°C。
3. 将40nmol/L的高浓度标准品稀释成40nmol/L(100ul + 100ul标准品稀释液),再稀释成一组标准品，如：40, 20, 10, 5.0, 2.5，1.25, 0.625nmol/L。
4. 配制工作液：取 HRP(一支)加入6ml 酶联物稀释液，混匀。然后在混匀液中加入Biotin(一支)，混匀。即得到工作液。 工作液最好在临用前15分钟配制。
警告及注意事项：
1. 不能使用过期产品。
2. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
操作步骤：
试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。 取出所需反应板。
1. 加入50ul标准品(Standards)、血清(1:1x稀释)相应反应板孔中。
2. 轻轻混匀30秒，封住板孔，室温温育 120分钟。
l 临用前15分钟配制工作液
3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。
4. 每孔加入100ul工作液。轻轻混匀30秒，封住板孔，室温温育 60分钟。
5. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。
6. 每孔加入50ul底物A和50ul底物B， 轻轻混匀10秒，室温暗处温育20±10分钟。
7. 每孔加入50ul终止液（Stop Solution)。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。
以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清或尿样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
