产品标准：荧光ECL检测试剂(A液25ml、B液25ml)

产品应用：免疫印记试验  

产品介绍：

    SuperECL Plus Western Blot超敏发光液
    Western Blot超敏荧光发光试剂用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统，SuperECL Plus Western Blot超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂。(A液25ml、B液25ml)
    极高灵敏度和高信噪比，检测10-100 fg抗原；
    可在日光灯下进行发光操作；
    节省抗体(1:2000-1:10000)

            使用方法
    1.执行常规SDS－PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意第二抗体用HRP标记的lgG, 或者用一抗抗体-链亲和素-生物素-HRP夹心方法。
    2.Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。工作液室温放置数小时灵敏度略有降低但仍可使用。
    3.用镊子取出Western Blot膜，沥干洗膜缓冲液。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟。延长孵育时间并无必要，过长的孵育时间甚至会降低灵敏度。
    4.用镊子夹起膜，沥干发光工作液。
    5.打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除皱褶。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将Western Blot膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
    6.暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
            储存条件：4 oC密封避光保存一年以上。

            安全性： 无特殊毒性，按普通化学品处理。
            注意事项：
    1.允许步骤2-5在日光灯下进行方便操作；但在强光下操作时间拖得太长，灵敏度可能会有一定程度降低，移到暗房操作可避免之。
    2.戴手套可以避免在膜上留下手印。
    3.长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。
    4.与工作液孵育1-5分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带可能发光较弱，但仍可成功进行X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。荧光可持续10小时以上，条带弱时可延长曝光至1-10个小时。
    5.由于超敏发光液及其灵敏，对大多数来源的进口抗体我们强烈推荐抗体的起始浓度为一抗1:1000，二抗1:2000。通常为一抗1:2000二抗1:4000或更加稀释。 抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败!
    6.某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
    7.使用预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标 签可精确确定条带位置和大小。

            试验问题解答:
    使用时连对照都无法显示
    问题解答：
    实验时注意以下问题：① 夏天天气炎热，显-定影系统必须现用现配，用完后及时更换。② 发光液在炎热的天气不要在室温搁置太久。 ③ 试剂中的A、 B液必须用时才混合，不要放置一段时间才用。④ 膜洗完后应沥干全部水分后再进行显-定影，不要带很多水