人抗增殖细胞核抗原Ki-67放免药盒说明书
Ki-67(HY-105) RIA KIT
Ki-67是一种与细胞分裂增殖有关的核蛋白,在有丝分裂的G0和G1。早期不表达,G1中期列晚期出现.S期和G2期逐渐增加,M期到最高值,随后快速降解。由于其表达量随细胞周期不同而发生改变.在细胞周期各阶段有动态变化,起一种计时分子的作用,因此被认为是评估人体肿瘤生长的一种重要工具。在血液肿瘤中,有大量的原始和幼稚细胞在骨髓、淋巴结中增殖. Ki-67的表达与肿瘤的良恶性生长方式、大小、中心有无
死亦有明显的关系,其检测已广泛应用于血液肿瘤的诊断.疗效监测和预后判断。
试剂盒组成与配制:
1、Ki-67标准品6瓶,其浓度分别为0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10ng/ml
2、125I-Ki-67 1 瓶。
3、Ki-67抗体 1 瓶,10.5ml。
4、缓冲液一瓶。
5、分离剂(第二抗体)一瓶。
标本的采集及保存
1、 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于3000转/分离心20分钟,取上清即可检测,或将标 本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2、 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3、 组织的提取:取大小适宜的组织块,立即称重后于煮沸的生理盐水(1ml)中煮
沸3分钟,再加1N冰醋酸0.5ml 于匀浆器中匀浆提取,再用1NNaOH 0.5ml中
和,离心3000转/分,30分钟(最好是低温离心)。取上清液贮存于-20℃以下
待测样本可保留2-3个月。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
药盒主要应用范围:
l 肿瘤标志物的研究,
l 细胞生物学的研究
l 血液系统的疾病的研究;
l 与其它内分泌激素的研究
l 药理学的研究
测定操作步骤:
Ki-67 RIA 操作程序 加样单位:ul
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试 剂 T NSB B0 S1-S8 标 本
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缓 冲液 —— 100 —— —— ——
零 标准 —— —— 100 —— ——
标 准 液 —— —— —— 100 ——
标 本 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I-ki-67 100 100 100 100 100
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混匀,4℃ 放置24小时
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分 离 剂 500 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟,3500转/分离心15分钟。弃上清,测沉淀计数(cpm)。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半 对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项:
1、本月标准品每瓶用 0.8 ml缓冲液稀释
2、本月药盒抗体每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释
3、本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
药盒的技术指标:
1、灵敏度:≤ 3Pg/ml。
2、重复性:批内cv< 8%,批间cv<12%。
3、回收率:平均回收率 88%。
4、正常参考值:1.75±0.56 ng/ml
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% 2.1 B0/T% 35 B/ B0 % 94 82 65 38 19
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生产日期:2011-06-05
有效日期:2011-07-05
生产批号:20110605
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