单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)又称单核细胞趋化和激活

因子（monoctye chemotactic and activating factor,MCAF)，属于C-C亚族（β亚族）成员。MCP-1/MCAF起初是从人髓样单核细胞系THP-1、神经胶质瘤细胞系以及LPS或PHA刺激的人PBMC培养上清中发现。目前已知，单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、B细胞、平滑肌细胞等在PHA、LPS、Poly I-C、IL-1、IFN-γ、PDGF、EGF或某些病毒刺激下均可诱导分泌MCP-1。某些肿瘤细胞系则可组成性产MCP-1

 

     1、MCP-1标准品7瓶，其浓度分别为15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000pg/ml。

     2、¹²⁵I-MCP-1   1 瓶。10.5ml

     3、MCP-1抗体  1 瓶，10.5ml。

     4、分离剂(第二抗体)一瓶

1. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

2. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

测定操作步骤：

 

                     MCP-1   RIA 操作程序     加样单位:ul

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             试  剂      T       NSB     B₀     S₁-S₈    标   本

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缓 冲液    ——       100     ——      ——       ——

零 标准    ——       ——     100      ——       ——

            标 准 液    ——       ——     ——      100       ——

      

 

     标    本    ——       ——     ——      ——       100   

            抗    体    ——       ——     100     100       100  

            ¹²⁵I-MCP-1   100      100     100     100       100

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                              混匀，4℃ 放置24小时

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            分 离 剂    500      500    500     500       500

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混匀，室温放置15分钟，3500转/分离心15分钟。弃上清，测沉淀计数(cpm)。

 

    以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

   在半 对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。   

        1、本月标准品每瓶用               ml缓冲液稀释

        2、本月药盒抗体每瓶用             ml缓冲液稀释

        3、本月药盒标记每瓶用             ml缓冲液稀释

 

 药盒的技术指标：

        1、灵敏度:≤ 3Pg/ml。

        2、重复性:批内cv< 8％,批间cv<12％。

        3、回收率:平均回收率 88％。  

        4、正常参考值：57.1±48.8 pg/ml

 

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           T       NSB       S₀           S₁      S₂        S₃      S₄       S₅        

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    CPM

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N/T%  2.1   B₀/T%   35   B/ B₀ %     94     82       65     38     19

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生产日期：2011-06-05

    有效日期：2011-07-05

    生产批号：20110605