尿皮质素(urocortin)放免药盒说明书
Ucn(HY-116) RIA KIT
尿皮质素Urocortin(Ucn)是一含40个氨基酸的多肽,属于促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)家族的新成员。它不仅在脑组织中表达,而且也存在于外周组织,特别是在心脏中高表达。Ucn有高效的心血管作用,它可以降血压、增强心脏收缩力,还可提高心肌细胞对缺血-再灌注损伤的抵抗力。urocortin II除增强心肌收缩外,还直接作用于心肌细胞,它增加蛋白合成。有试验证明:心肌病小鼠模型滴注Urocortin,心肌收缩增强,体循环血管阻力降低。
试剂盒组成与配制:
1、Ucn标准品1瓶,1000pg/瓶。用时每瓶加缓冲液1ml,然后倍比稀释成浓度为
128、64、32、16、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5pg/ml。
2、125I-Ucn 一瓶。
3、Ucn抗体 一瓶。
4、缓冲液 一瓶。
5、分离剂(第二抗体)一瓶.
样本收集和提取:
1、 静脉血3ml,注入含0.5M EDTA-Na2 30ul的试管中,混匀,离心,取血浆用66%的甲醇
提取,真空干燥测定时用缓冲液复溶测定。
如贮于-20℃2-3月内测定不影响结果。
2、 组织的提取:取大小适宜的组织块,立即称重后于煮沸的生理盐水(1ml)中煮
沸3分钟,再加1N冰醋酸0.5ml 于匀浆器中匀浆提取,再用1NNaOH 0.5ml中
和,离心3000转/分,30分钟(最好是低温离心)。取上清液贮存于-20℃以下
待测样本用66%的甲醇提取,真空干燥测定时用缓冲液复溶测定。可保留2-3个月。
测定操作步骤:
Ucn RIA 操作程序 加样单位:ul
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试 剂 T NSB B0 S1-S8 标 本
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缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 液 —— —— —— 200 ——
标 本 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
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混匀,4℃ 放置24小时
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125I-Ucn 100 100 100 100 100
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混匀,4℃ 放置24小时
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分 离 剂 500 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟,3500转/分离心15分钟。弃上清,测沉淀计数(cpm)。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项:
1、本月标准品每瓶用 ml蒸馏水稀释
2、本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
3、本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
正常参考值:
各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考
正常值约为8.14±1.43pg/ml
药盒的技术指标:
1、灵敏度:≤ 3Pg/ml。
2、重复性:批内cv< 8%,批间cv<12%。
3、回收率:平均回收率 88%。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期:
有效日期:
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