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                    解偶联蛋白3放免药盒操作说明书

                       UCP-3(HY-10209) RIA  KIT
       目前已发现5 种不同的UCPs 家族成员,分别为UCP1、UCP2、UCP3、UCP4、和UCP5/ BMCP1。UCPs 的共同特征是其单体由大约300 个氨基酸组成,每个单体均具有6 个穿膜结构域,UCPs 只有二聚体才有转运功能,UCPs 家族每个成员均有3 个由100 个氨基酸组成的重复序列。在上述几种解偶联蛋白中,由于UCP3 主要分布在骨骼肌中,与运动关系密切。通过对人类骨骼肌cDNA 文库筛选,Boss 等发现了两条RNA 转录产物,由于其与UCP1 的高度同源性,从而命名为UCP3 (在同一年的早些时候已经发现了UCP2) ,UCP3 根据其氨基酸的长度不同,分为长链UCP3 (UCP3L) 和短链UCP3 (UCP3S) 。Solanes 等确定了其在染色体上的位置及基本结构,UCP3 由7 个外显子构成,长度为8. 5 kb 左右,位于11 号染色体的长臂(11q13) ,与UCP2 相邻。

    药盒组成:(常温运输,4℃保存)
71. UCP-3缓冲液1瓶
72. UCP-3(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
73. UCP-3标准品7瓶,浓度为0.25、0.5、1、2、5pg/mL
74. UCP-3抗体 1瓶。
75. 125I –UCP-3 1瓶  
 
     测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                       UCP-3  RIA加液程序    (单位: ul )
           ————————————————————————————
              试   剂      T     NSB      S0     S1~S5      样  品
           ————————————————————————————
              缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
              标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
              样    品    ——    ——    ——    ——      100
              抗    体    ——    ——    100     100       100
              125I- UCP-3   100     100     100     100       100
           ————————————————————————————
                             摇匀4℃ 放置24小时
           ————————————————————————————
              分 离 剂    ——   500      500     500       500
   
       ————————————————————————————
混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。

  结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:  
      本月标准品每瓶用   0.5       ml 缓冲液稀释
      本月药盒抗体每瓶用   10     ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用  10.5ml   ml缓冲液溶解
      本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
   本试剂盒主要技术指标:
72、 NSB:<5%。
73、 灵敏度:<100pg/ml。
74、 标准曲线范围:0-4000ng/L
75、 批内变异系数:CVw<7.4%;
      批间变异系数:CVw < 10% 。
76、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                 1.26±0.47 pg/mL
     本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
           T       NSB       S0           S1        S2          S3         S4         S5    
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————

      生产日期:
      有效日期:
      生产批号:
  
试剂厂家:北京华英生物技术研究所(本药盒抗原抗体由SIGMA-ALDRICH公司购买)

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          北京华英生物技术研究所
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