血管内皮生长因子A放免药盒操作说明书 VEGF-A(HY-10139)RIA KIT 人类VEGF-A基因位于染色体6p21,全长28kb,编码VEGF的基因长14kb,由8个外显子和7个内含子组成。经剪切后有5种不同的单体,根据氨基酸数目命名为VEGF-A201、VEGF-A14、VEGF-A165、VEGF-A189、VEGF-A206。VEGF的结构域由外显子1-5编码,外显子8编码的肽段存在于所有单体中。VEGF-A165是最重要的同源单体,缺少由外显子6编码的残基,有肝素结合位点!既可以分泌到细胞外也可以结合到细胞表面或细胞外基质,而VEGF-A121缺少由外显子6和7编码的残基,是一种不与肝素结合的酸性多肽,缺失肝素的结合位点导致显著的促有丝分裂活性丧失,VEGF-A189和VEGF-A206则是强碱性,与肝素具有高度亲和性,而在细胞外基质中几乎被完全分离,VEGF-A165具有****的生物利用度和生物潜能。VEGF-A是一种重要的血管生长因子。它通过与VEC和其它细胞表面受体(VEGFR一1、VEGFR-2和neuropilin)结合发挥作用。本所利用抗原抗体特异性结合的特点,用液相竞争法原理建立了快速、简便的VEGF-A放射免疫方法,对血清浓度进行直接检测。 【药盒组成】
(常温运输,4℃保存) 11、 VEGF-A缓冲液(液体)1瓶,10ml,用前加蒸馏水稀释到50ml。 12、 PR分离剂(第二抗体)1瓶,60ml。 13、 VEGF-A标准品(冻干品)6瓶浓度为25、50、100、200、400、800pg/ml 14、 VEGF-A抗体1瓶(冻干品)。 15、 125I - VEGF-A 1瓶(冻干品)。
【测定方法】 VEGF-A RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I VEGF-A 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 充分摇匀4℃温育24小时以上 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温放置15分钟后,4℃ 3500转/分 离心 15分钟 ,弃上清液,测沉淀cpm。
【计算结果】 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序,直接给 出有关参数,标准曲线及样品浓度。
【注意事项】 本月标准品每瓶用 0.8 ml缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 11 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 主要技术指标: 1、灵敏度:<0.05pg/ml。 2、测定范围:25-800 pg/ml 3、准确性:回收率:91.7% ~101.3% ,平均回收率95.6%。 4、批内变异系数:CVw<4.5 %, 批间变异系数:CVw < 9.5% 。 5、特异性:VEGF-A抗血清IL1-а、IL-2、EPO、GM-CSF、TNF等均无交叉反应。 6、正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 35-155pg/ml,均值 71.25±30pg/ml 本月药盒参考数据: ——————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 ————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————
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