软骨寡聚基质蛋白放免说明书
COMP(HY-10151) RIA KIT comp是细胞外基质蛋白的一种,属于凝血栓蛋白家族。此蛋白含有5个分子量87kD的亚单位,通过链间二硫键连接成分子量为435kD的五聚体蛋白。此种连接是通过亚单位内的氨基酸区实现的,另外还有4个类表皮生成因子的重叠与7个TSP-3重叠,TSP-3重叠内包含一类调钙蛋白的钙离子结合区基序,最后是一个羟基球型区。电镜下可见COMP分子由5个可弯曲的臂组成。本药盒应用放射免疫分析方法测定。在竞争抑制反应中采用顺序饱和法,对病人血清样品进行直接测定。标准品、样品中的comp与限量的抗血清预先反应一段时间,然后加入125I-COMP参与竞争剩余的抗血清结合位。当被测物中COMP的浓度高时,剩余的抗血清结合位就少,从而与抗血清结合的125I-COMP就少。利用分离剂分离出抗原-抗血清复合物,并测定复合物中的放射性计数。125I-COMP的结合量与样品中COMP的浓度呈函数关系,通过数据处理可求出样品中COMP的浓度值。
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
该药盒主要应用范围: * 脊椎疾病的研究 药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1. COMP缓冲液1瓶 2. COMP(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。 3. COMP标准品7瓶,浓度为0、2、4、8、16、32、64U/L 4. COMP抗体 1瓶。 5. 125I –COMP 1瓶 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: COMP RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- COMP 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放置24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 注意事项: 本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 10.5 ml缓冲液溶解 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 本试剂盒主要技术指标: 1、 NSB:<5%。 2、 灵敏度:<100pg/ml。 3、 标准曲线范围:0-2000ng/L 4、 批内变异系数:CVw<7.1%; 批间变异系数:CVw < 10% 。 5、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 大鼠血清 9.474±2.326 U/L 本月药盒参考数据: ————————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 ————————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————————
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