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                    NADPH氧化酶放免试剂盒说明书
           
  NOX-2(HY-10215) RIA  KIT
        NOX2(NOX2,NADPH oxidase 2)首先在中性粒细胞和吞噬细胞内发现,因此常被称为吞噬细胞NADPH氧化酶。NOX2在B淋巴细胞、内皮细胞核神经细胞中也有少量表达。在各个器官NOX家族亚基mRNA的组织分布时发现NOX2是分布最广泛的,如胸腺,小肠、脾、胰腺、卵巢、胎盘、前列腺中均有分布。NOX2分布的广泛性也可能是由于它们都含有表达NOX2的外周血细胞而造成的。在吞噬细胞内,NOX2既存在于细胞内,也存在于胞膜。在静息状态的中性粒细胞内,NOX2主要定位在细胞内,当吞噬细胞受到刺激时,同吞噬小体或细胞膜发生融合,NOX2易位到细胞的表面。这种融合在NOX2杀微生物的活性中起关键作用。除了这种融合之外,细胞内产生的ROS也能通过信号转导通路激活NOX2。除了吞噬细胞以外,其它细胞分布主要是依赖其细胞类型的特异性。在平滑肌细胞中,NOX2同其核周围的细胞骨架紧密结合。NOX2在海马神经元中主要位于膜的突触部位,使它在记忆中起重要作用。
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
 
  该药盒主要应用范围:
*动脉粥样硬化
*各种肿瘤疾病         
  药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1. NOX2缓冲液1瓶
2. NOX2(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3. NOX2标准品5瓶,浓度为10、20、40、80、160 pg/mL
4. NOX2抗体 1瓶。
5. 125I –NOX2 1瓶  
 
 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                       NOX2  RIA加液程序    (单位: ul )
           ————————————————————————————
              试   剂      T     NSB      S0     S1~S5      样  品
           ————————————————————————————
              缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
              标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
              样    品    ——    ——    ——    ——      100
              抗    体    ——    ——    100     100       100
              125I- NOX2   100     100     100     100        100
           ————————————————————————————
                             摇匀4℃ 放置24小时
           ————————————————————————————
              分 离 剂    ——   500      500     500       500
   
          ————————————————————————————
混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。

结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:  
      本月标准品每瓶用           ml 缓冲液稀释
      本月药盒抗体每瓶用         ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用         ml缓冲液溶解
      本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
   本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
2、 灵敏度:<1 pg/ml。
3、 标准曲线范围:10-160pg/ml
4、 批内变异系数:CVw<7.3%;
      批间变异系数:CVw < 10% 。
5、 正常参考值:27.25±10.65pg/ml各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                
     本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
           T       NSB       S0           S1        S2          S3         S4         S5    
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————

  

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