NADPH氧化酶放免试剂盒说明书 NOX-2(HY-10215) RIA KIT NOX2(NOX2,NADPH oxidase 2)首先在中性粒细胞和吞噬细胞内发现,因此常被称为吞噬细胞NADPH氧化酶。NOX2在B淋巴细胞、内皮细胞核神经细胞中也有少量表达。在各个器官NOX家族亚基mRNA的组织分布时发现NOX2是分布最广泛的,如胸腺,小肠、脾、胰腺、卵巢、胎盘、前列腺中均有分布。NOX2分布的广泛性也可能是由于它们都含有表达NOX2的外周血细胞而造成的。在吞噬细胞内,NOX2既存在于细胞内,也存在于胞膜。在静息状态的中性粒细胞内,NOX2主要定位在细胞内,当吞噬细胞受到刺激时,同吞噬小体或细胞膜发生融合,NOX2易位到细胞的表面。这种融合在NOX2杀微生物的活性中起关键作用。除了这种融合之外,细胞内产生的ROS也能通过信号转导通路激活NOX2。除了吞噬细胞以外,其它细胞分布主要是依赖其细胞类型的特异性。在平滑肌细胞中,NOX2同其核周围的细胞骨架紧密结合。NOX2在海马神经元中主要位于膜的突触部位,使它在记忆中起重要作用。 标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。 该药盒主要应用范围: *动脉粥样硬化 *各种肿瘤疾病 药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1. NOX2缓冲液1瓶 2. NOX2(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。 3. NOX2标准品5瓶,浓度为10、20、40、80、160 pg/mL 4. NOX2抗体 1瓶。 5. 125I –NOX2 1瓶 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: NOX2 RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- NOX2 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放置24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 注意事项: 本月标准品每瓶用 ml 缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液溶解 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 本试剂盒主要技术指标: 1、 NSB:<5%。 2、 灵敏度:<1 pg/ml。 3、 标准曲线范围:10-160pg/ml 4、 批内变异系数:CVw<7.3%; 批间变异系数:CVw < 10% 。 5、 正常参考值:27.25±10.65pg/ml各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 本月药盒参考数据: ————————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 ————————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————————
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