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                            I型胶原蛋白放免说明书
                                                 COI(HY-10091) RIA  KIT
          I型原胶原蛋白(Collagen Type I,COI)即I型胶原蛋白的前体,比I型胶原蛋白在结构上多2个末端前肽(properplide)结构C前肽与N-前肽)。I型原胶原蛋白具有胶原蛋白家族中所有原胶原蛋白的典型特征:首先含有一段具有Gly-X-Y)n 重复序列的三聚体结构,在N端与C端的2个前肽形成非螺旋的结构域NC结构域,位于Gly-X-T)n 重复序列两侧,NC 结构域再进一步形成球状结构。I型胶原蛋白的基因长约40kb,包含了52个外显子,编码的单体α肽链包含1464个氨基酸残基。胶原蛋白为生物体提供了一种机械支撑作用,维护器官与组织的完整性,保障其正常功能的行使,这对于实质性器官而言非常重要。胶原蛋白是实质性器官—基底膜的主要成分,在骨骼中超过80%的有机质就是I型胶原蛋白,I型胶原蛋白在骨骼与结缔组织中发挥作用的主要方式是形成和保持骨架的完整性;除此之外,胶原在形成特定的细胞外微环境中也起到主要作用,而这些微环境对于维持细胞的完整性及传递细胞外信号非常关键。

标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。

该药盒主要应用范围:
    * 肿瘤疾病的研究
   * 免疫性疾病研究
 
    药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1. COI缓冲液1瓶
2. COI(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3. COI标准品7瓶,浓度为50、100、200、400、800、1600 ng/mL
4. COI抗体 1瓶。
5. 125I –COI 1瓶  
 
     测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                       COI  RIA加液程序    (单位: ul )
           ————————————————————————————
              试   剂      T     NSB      S0     S1~S5      样  品
           ————————————————————————————
              缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
              标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
              样    品    ——    ——    ——    ——      100
              抗    体    ——    ——    100     100       100
              125I- COI   100     100     100     100       100
           ————————————————————————————
                             摇匀4℃ 放置24小时
           ————————————————————————————
              分 离 剂    ——   500      500     500       500
   
          ————————————————————————————
混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。

  结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:  
      本月标准品每瓶用     0.5       ml 缓冲液稀释
      本月药盒抗体每瓶用   10.5     ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用   10.5     ml缓冲液溶解
      本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
   本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
2、 灵敏度:<100pg/ml。
3、 标准曲线范围:0-4000ng/L
4、 批内变异系数:CVw<7.3%;
      批间变异系数:CVw < 10% 。
5、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                 184.44±27.20 ng/mL
     本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
           T       NSB       S0           S1        S2          S3         S4         S5    
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
             N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
    —————————————————————————————————————————

     
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