白三烯放免药盒操作说明书
LTS(HY-10082) RIA KIT 白三烯是从花生四烯酸在白细胞中代谢产物分离得到的具有共轭三烯结构的二十碳不饱和酸。可按取代基性质分为A、B、C、D、E、F六类,其中LTA3的结构为2001下标3代表碳链中双键总数。LTA4为5,6-环氧-7,9,11,14-二十碳四烯酸;LTB4为5,12-二羟基-6,8,10,14-二十碳四烯酸;LTC4为5-羟基-6-S-谷胱甘基-7,9,11,14-二十碳四烯酸;LTD4、LTE4、LTF4与LTC4类似,只是6位取代基LTD4不含谷氨酸,LTF4不含甘氨酸,LTE4只有半胱氨酸,其他白三烯命名法类似。白三烯可由花生四烯酸经脂(肪)氧合酶(lipoxygenase)催化而制得。在体内含量虽微,但却具有很高的生理活性,并且是某些变态反应、炎症以及心血管等疾病中的化学介质。白三烯及其类似物——阻断剂的研究,对于免疫以及发炎、过敏的治疗都有重要意义。 本药盒利用放射免疫分析方法进行测定。在均相竞争抑制反应中采用平衡法,用免疫分离剂分离出抗原—抗血清复合物,并测定复合物中放射性计数。125I-LTS的结合量与样品中LTS的浓度呈函数关系,通过数据处理可求出样品中LTS的含量。
药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1. LTS缓冲液1瓶 2. LTS(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。 3. LTS标准品7瓶,浓度为0、50、100、200、400、800、1600pg/mL 4. LTS抗体 1瓶。 5. 125I –LTS 1瓶 标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: LTS RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- LTS 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放置24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 注意事项: 本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 10 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 10.5ml ml缓冲液溶解 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 本试剂盒主要技术指标: 1、 NSB:<5%。 2、 灵敏度:<100pg/ml。 3、 标准曲线范围:0-4000ng/L 4、 批内变异系数:CVw<7.1%; 批间变异系数:CVw < 10% 。 5、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 170.32士15.28 pg/mL 本月药盒参考数据: ————————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 ————————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————————
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