硫氧还原蛋白还原酶放免药盒操作说明书
TrxR(HY-076) RIA KIT 硫氧还蛋白还原酶是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员.它和硫氧还蛋白、NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统.TrxR有很多生物学功能,与人类某些疾病的发病机制也密切相关。由还原型 NADP催化硫氧还蛋白还原的酶。EC1.6.4.5.。含有一个分子的FAD。使氧化型硫氧还蛋白的胱氨酸残基还原,变成一对半胱氨酸残基,后者进一步成为核糖核苷酸还原的电子供体。它存在于大肠杆菌、酵母、肝脏以及肿瘤细胞中。硫氧还蛋白还原酶是含硒酶,其主要功能是催化NADPH还原硫氧还蛋白。它在促进与肿瘤发生发展相关的多重细胞活动中有很重要的作用,这些活动包括细胞增殖、凋亡和细胞信号传导等。作为含硒酶,硒代半胱胺酸残基位于TrxR分子羧基端的倒数第二位,暴露于酶的表面,具有很高的活性且在催化作用中很容易被接近。而且,硒代半胱胺酸残基的pKa值约为5.2,因而在生理pH时处于非质子化的硒醇盐状态。这两个特点使得TrxR易被烷化剂或者亲电化合物修饰,导致失活。这种氧化还原酶在肿瘤中高表达,近几年大量研究表明它是抗癌剂治疗癌症的有效分子靶。
药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1. TrxR缓冲液1瓶 2. TrxR(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。 3. TrxR标准品7瓶,浓度为10、20、40、80、160、320ng/mL 4. TrxR抗体 1瓶。 5. 125I –TrxR 1瓶
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: TrxR RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- TrxR 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放置24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 注意事项: 本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 10 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 10.5ml ml缓冲液溶解 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 本试剂盒主要技术指标: 1、 NSB:<5%。 2、 灵敏度:<100pg/ml。 3、 标准曲线范围:0-4000ng/L 4、 批内变异系数:CVw<7.1%; 批间变异系数:CVw < 10% 。 5、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 38.502士12.861 U/L 本月药盒参考数据: ————————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 ————————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————————
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