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您的位置:首页 >> 产品介绍 >> O~6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶活性的检测说明书
 
 
                                                                                                                                       本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断
     O^6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶活性
                    放免试剂盒说明书
                                AGAT(HY-10220) RIA  KIT
     O^6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶活性((O~6-alkylguanine-DNA alkyltransferase ,AGAT) 是DNA中O~6-烷基鸟嘌呤的主要修复蛋白,能直接将甲基从DNA链鸟嘌呤O6位上的甲基移到蛋白质的半胱氨酸残基上而修复损伤的DNA。这个酶的修复能力并不很强,但在低剂量烷化剂作用下能诱导出此酶的修复活性。O~6-烷基鸟嘌呤是由环境中或药物中的烷基化化学物质诱导产生的一种重要的前突变病变。外界环境中的致癌物和致突变物(包括N-亚硝基化合物),许多属于烷基化合物,O~6-烷基鸟嘌呤是由烷基化学物诱导产生的重要的DNA突变前损伤产物。
测定原理:采用竞争机制原理,标准品或样品中的AGAT和加入的125I –AGAT共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
该药盒主要应用范围:
 肿瘤性疾病
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1、 AGAT缓冲液1瓶
2、 AGAT(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3、 AGAT标准品6瓶,浓度为5、10、25、50、100、200 umol/g/hr
4、 AGAT抗体 1瓶。
5、 125I –AGAT 1瓶  
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                       AGAT  RIA加液程序    (单位: ul )
           ————————————————————————————
              试   剂        T     NSB      S0     S1~S5      样  品
           ————————————————————————————
              缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
              标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
              样    品      ——    ——    ——    ——      100
              抗    体     ——    ——    100     100       100
        125I- AGAT   100     100     100     100       100
           ————————————————————————————
                             摇匀4℃ 放置24小时
           ————————————————————————————
              分 离 剂    ——   500      500     500       500
              ————————————————————————————
混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:  
      本月标准品每瓶用           ml 缓冲液稀释
      本月药盒抗体每瓶用         ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用         ml缓冲液溶解
      本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标
1、 NSB:<5%。
2、 灵敏度:<0.5 umol/g/hr。
3、 标准曲线范围:5-200umol/g/hr
4、 批内变异系数:CVw<7.3%;
      批间变异系数:CVw < 10% 。
5、 正常参考值:15umol/g/hr各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
本月药盒参考数据:
 —————————————————————————————————————————
          T    NSB    S0     S1     S2    S3     S4      S5     S6
 —————————————————————————————————————————
  CPM
 —————————————————————————————————————————
         N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
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      生产日期:2012-06-01
      有效日期:2012-07-01
      生产批号:20120601
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