科研药盒，慎用于临床

                                              溶菌酶试剂盒操作说明书
                                                     Lysozyme (HY-60061)
     溶菌酶（Lysozyme）又名N 一乙酰胞壁酰基水解酶，是一种碱性蛋白质， 由120个氨基酸残基组成，分子量Mr=14.4KDa,PI=5-11。血清中溶菌酶主要来源于单核一巨噬细胞和中性粒细胞，它能水解革兰氏阳性细菌和部分革兰氏阴性细菌细胞壁中多糖组分的N 一乙酰胞壁酸（1→4）N 一乙酰葡糖胺键, 而破坏细菌。它在自然界中广泛存在于哺乳动物乳汁、体液、禽类的蛋白、微生物体内及木瓜、卷心菜、大麦等植物中，在人乳汁、蛋清和各种动物组织中含量较高， 其中以蛋清中的溶菌酶的含量最为丰富可达0.3%。 尿液和血液中含量甚微， 但单核细胞白血病病人的尿液和结肠癌细胞中溶菌酶含量显著升高。溶菌酶具有溶菌、杀菌、抗病毒、抗肿瘤细胞的作用， 而且对人体无任何毒副作用。
检测原理：在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细胞裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量
标本处理：血清标本4℃保存稳定1周，-20℃冰冻可稳定3个月
试剂盒组成：
试剂1：菌粉：5mg×4支
试剂2：菌粉溶剂：100ml×1瓶
试剂3：标准品：粉剂2mg×1支  
试剂配制
1、贮备菌液的配制
取5mg/支的菌粉1支，倒入匀浆管中，加菌粉溶剂1ml,轻轻缓慢上下旋转研磨3分钟（切勿溅出），即为贮备菌液，将其取出后置2-8℃冰箱密封保存一周左右。
2、应用菌液的配制
按贮备菌液：菌粉溶剂=1:19进行配制，需多少配多少。剩下的应用菌液2-8℃可保存一周左右。最好是现用现配，用时摇匀。
3、标准品的配制
标准品贮备液的配制：将标准品2mg准确加蒸馏水1.0ml，混匀，配成160000U/ml的标准品
贮备液。
标准液的配制：取适量的标准品贮备液，用蒸馏水分别稀释成2000U/ml、1000U/ml、
500U/ml、250U/ml、125U/ml、62.5U/ml、31.25U/ml、15.625U/ml的不同浓度的标准液。
操作步骤
将应用菌液及各种浓度的溶菌酶标准液置于0℃的冰水中预冷5分钟以上。

                          溶菌酶操作步骤                        （单位ul）
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         对照管  15.625   31.25    62.5    125    250    500   1000   2000
                        U/ml    U/ml    U/ml   U/ml   U/ml   U/ml  U/ml   U/ml
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蒸馏水            200        ——     ——    ——   ——   ——    ——    ——   

标准液            200       200     200     200     200    200    200     200
应用菌液          2000   2000     2000    2000   2000   2000   2000   2000   

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37℃孵育15min，立即取出置于0℃以下的冰水浴中3min，逐管取出，倒入1cm光径比色皿中，530nm处，蒸馏水调透光度100%，比色，测各管透光度T15(T15即37℃水浴15分钟后的透光度值)
计算结果
以各标准管的单位浓度为横坐标，以各管透光度差值为纵坐标作图。
             
正常参考值：
各实验室应建立自己的正常值，正常参考值仅供参考：
唾液正常值：251.43U/ml
鱼血清：283.871U/ml
鱼肝脏：45.944 U/mg prot
注意事项：
1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准，准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮   肤和眼睛，切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
5．菌粉尽量研磨碎，磨匀，研磨时防止菌液溅出
6.菌液、标准品、样本必须先在0℃冰水浴中预冷5分钟以上，37℃水浴前的操作最好在冰水浴中进行。
7.为了避免检测误差，空白管单独用一个比色皿比色，每次加样前或比色之前比色杯要先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗2-3遍。
8.比色时各管从冰水中逐个取出比色。比色皿过冷会在皿壁上形成水雾，所以要擦干再比色。
9.试管要用同一批次
10.为了减少误差1cm光径的比色皿也要进行校正
11.比色与计时要同步，准确控制时间。最好为二个人或者用自动生化分析仪。

本试剂盒主要技术指标：
1、 线性范围：0-2000U/ml
2、 精密度：批内变异系数：CVw<7.3%；
      批间变异系数：CVw < 10% 。
3、 灵敏度：<1.56U/ml

生产日期：
有效日期：
生产批号：
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