本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断 硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书 SCD(HY-100234) RIA KIT 硬脂酰辅酶A 去饱和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase, SCD) 是催化饱和脂肪酸(saturated fattyacid, SFA) 第9 位碳链形成n-9 系单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA) 的关键酶。理论上其底物是十二碳到十八碳的饱和脂肪酸,实际在细胞内其底物以棕榈酸(C16:0) 和硬脂酸(C18:0) 为主。分别生成的棕榈油酸和油酸是磷脂和中性脂( 包 括甘油三酯和胆固醇酯等) 的重要组成部分。SCD 的调控作用与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。
标本的收集:匀浆液,离心,取上清 反应原理:用碳14标记硬脂酸作为底物,加入一系列SCD酶促试剂,经酶作用后得到的产物,通过适当的分离,测定产物的脉冲数即可换算出酶的活力单位。 该药盒主要应用范围: 脂代谢方面的研究 药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1. 缓冲液 1瓶 2. 酶促试剂 1瓶(含MgCL2,ATP,NADH、BSA、GSH、辅酶A) 3. 碳14标记硬脂酸 1瓶(溶于甲苯中)(Amershanm Biosciences) 4.闪烁剂 1瓶(含PPO、POPOP、甲苯、TrtionX-100) 5. 终止液 1瓶(含KOH、甲醇) 6.硬脂酸油酸溶液 1瓶 7.盐酸溶液 1瓶 8、三氯化硼乙醚甲醇溶液 1瓶 9.正己烷乙醚溶液(9:1) 1瓶 10.硅胶板 1块 11.展开剂 1瓶 12.2,7二氯荧光素乙醇溶液 1瓶 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: SCD RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 样 品 —— —— 100 酶促试剂 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀,37度5分钟 ———————————————————————————— 标记物 5 5 5 ———————————————————————————— 混匀,37度10分钟后 ———————————————————————————— 终止液 100 100 100 ———————————————————————————— 硬脂酸油酸 5 5 5 ———————————————————————————— 80度水浴30分钟 ———————————————————————————— 盐酸溶液 100 100 100 ———————————————————————————— 混匀 室温10分钟 ———————————————————————————— 三氯化硼乙醚甲醇100 100 100 ———————————————————————————— 80度水浴30分钟 ———————————————————————————— 正己烷 300 300 300 ———————————————————————————— 振荡,离心萃取,取上层,重复两次,并在氮气下吹干 ———————————————————————————— 正己烷 100 100 100 ———————————————————————————— 取10微升上述溶液放在硅胶板点样,进行薄层层析, 将薄板上的油酸甲酯的位置上的硅胶粉放到闪烁瓶中,上机,测CPM值。
结果计算: 酶活力=饱和脂肪酸的单不饱和脂肪酸的放射活性的量 (每毫克酶蛋白每分钟形成多少纳摩尔的油酸 oil nmol/min/mg protein) 注意事项: 薄板层上硅胶粉油酸甲酯放射性位置的确定:点样1小时以后,用2,7二氯荧光素乙醇液喷,在紫外灯下,油酸甲酯酯位置发出荧光,确定其位置,将此位置上的硅胶粉取出称重,然后放到闪烁瓶中进行测量。(确定位置时应稍大于荧光标识面积,以避免移取过程中损失) 生产日期: 有效日期: 生产批号: 地址:北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A 北京华英生物技术研究所 免费电话: 8008109828 邮 编:100085 电 话:(010)88114651 (010)56146198 传 真:(010)88112680 网址:www.sinoukbio.com E-Mail:sinouk@163.com QQ客服:1749417768
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