科研药盒,慎用于临床 总谷胱甘肽试剂盒说明书 GSH(HY-60008)KIT 谷胱甘肽(glutathioneGSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合,含有巯基的的三肽,具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为G-SH),易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、芥子气,铅、汞、砷等重金属)等结合,而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)能参与生物转化作用,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能。 检测原理: 试剂盒中含有DTNB:5,5’–二硫代–双–(2–硝基苯甲酸),能和谷胱甘肽(GSH)反应产生2–硝基–5–巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG),由于2–硝基–5–巯基苯甲酸是一黄色产物,通过测定其在412 nm处的最大吸收可确定样品中谷胱甘肽的含量。GSSG在谷胱甘肽还原酶作用下生成GSH,GSH又和DTNB作用生成2–硝基–5–硫基苯甲酸,利用这一循环反应可提高总谷胱甘肽测定的灵敏度。 试剂盒组成: 试剂1(R1):去蛋白试剂 1瓶 试剂2(R2):液体 1瓶(含谷胱甘肽还原酶) 试剂3(R3):液体 1瓶(含 DTNB) 试剂4(R4):液体 1瓶 (含NADPH) 标准瓶:1瓶 操作步骤: 有半自动和全自动生化仪的直接定标,空白调零,在机器上直接读取结果。 有分光光度计的,将标准品用缓冲液(R1)进行倍比稀释后在分光光度计上读取OD值,将未知标本的OD值在曲线上查出对应的浓度值。 总GSH操作步骤 单位(ul) 样品 血清 50微升 组织液100或200微升 正常值、质控:50微升 ————————————————————————————————————— 对照管 标准管 样本 —————————————————————————————————————— 样本 —— —— 50 蒸馏水 50 —— —— 标准品 —— 50 —— 试剂1 50 50 50 —————————————————————————————————————— 室温 5min 3500转/分 离心 10min —————————————————————————————————————— 试剂2: 100 100 100 试剂3: 100 100 100 —————————————————————————————————————— 室温 5min
—————————————————————————————————————— 试剂4: 100 100 100 —————————————————————————————————————— 动力学法 延迟时间 20秒 测量时间 20秒 412nm 定标3.34,直接半自动或全自动生化仪上读取结果;或者将标准品用缓冲液(R1)进行倍比稀释后在分光光度计上读取OD值,将未知标本的OD值在曲线上查出对应的浓度值。全自动或半自动生化仪直接读取数据。 计算结果 适用于分光光度计:将标准品用缓冲液(R1)进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标,以对应管的吸光度OD值为纵坐标作图,待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。() 全自动或半自动生化仪直接读取数据, 正常参考值: 各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考: 10-15umol/L 注意事项: 1. 全血标本不能有凝块。 2.每次测定对照管吸光度应比较恒定,若吸光度降低应重新配制乙酰胆碱标准液。 3.碱性羟胺加入后,须待1min以上再加酸,以保证其与乙酰胆碱充分作用。 4.此法显色不稳定,特别是室温超过20℃时影响明显。因此,室温较高时,最好于冰水浴操作,并在5~10min内比色完毕。 样品测定值超过上限,用生理盐水稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。 5.本产品应在2~8℃避光贮存,避免在2~8℃以上及0℃以下存放。 本试剂盒主要技术指标: 1、线性范围:0-20umol/L 2、精密度:批内变异系数:CVw<7.3%; 批间变异系数:CVw < 10% 3、灵敏度:<0.1 umol/L
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