科研药盒,慎用于临床 乙酰胆碱试剂盒说明书 Ach(HY-60090) KIT 乙酰胆碱是由胆碱和乙酰辅酶A在胆碱乙酰移位酶(胆碱乙酰化酶)的催化作用下合成的。由于该酶存在于胞浆中,因此乙酰胆碱在胞浆中合成,合成后由小泡摄取并贮存起来。血清胆碱酯酶测定的临床意义在于酶活性的降低。肝脏合成PChE,故肝实质细胞损害时PChE酶活性降低。有机磷毒剂是AChE及PChE的强烈抑制剂,测定血清胆碱酯酶与测定全血胆碱酯酶一样,是协助有机磷中毒诊断及预后估计的重要手段。 一、 检测原理: 血清胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸。未被水解的剩余乙酰胆碱与碱性羟胺作用,生成乙酰羟胺。乙酰羟胺在酸性溶液中与高铁离子作用,形成棕色复合物。根据颜色深浅计算出剩余乙酰胆碱含量,从剩余的乙酰胆碱量可以算出酶所水解的乙酰胆碱量。后者与血清中酶活力成正比。由此可与标准氯化乙酰胆碱溶液测定结果比较,计算出血清胆碱酯酶活力浓度单位。 二、试剂组成: 试剂1:缓冲液:包括甲液、乙液 各1瓶 (使用前甲液和乙液混合) 试剂2:碱性羟胺溶液 1瓶 试剂3:溶液 1瓶 试剂4:显色液 1瓶 标准品 1瓶 三、操作步骤:
乙酰胆碱操作步骤 单位(ul) ————————————————————————————————————— 对照管 标准管 样本 —————————————————————————————————————— 样本 —— —— 30 蒸馏水 30 30 —— 标准品 —— 30 —— 试剂1 100 100 100 试剂2 100 100 100 试剂3 200 200 200 —————————————————————————————————————— 混匀 ——————————————————————————————————————— 试剂4: 500 500 500 ——————————————————————————————————————— 混匀,离心3500转/分,5分钟,检测上清液,终点法,以空白管调零540nm波长,用标准品定标150,
四、计算结果 适用于分光光度计:将标准品用缓冲液(R1)进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标,以对应管的吸光度OD值为纵坐标作图,待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。 全自动或半自动生化仪直接读取数据 五、正常参考值: 各实验室应建立自己的正常值 正常参考值仅供参考:102-212ug/ml 均值:142±60ug/ml
六、注意事项: 1. 全血标本不能有凝块。 2.每次测定对照管吸光度应比较恒定,若吸光度降低应重新配制乙酰胆碱标准液。 3.碱性羟胺加入后,须待1min以上再加酸,以保证其与乙酰胆碱充分作用。 4.此法显色不稳定,特别是室温超过20℃时影响明显。因此,室温较高时,最好于冰水浴操作,并在5~10min内比色完毕。 样品测定值超过上限,用生理盐水稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。 5.本产品应在2~8℃避光贮存,避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
七、本试剂盒主要技术指标: 1、线性范围:0-1600ug/ml 2、精密度:批内变异系数:CVw<7.3%; 批间变异系数:CVw < 10% 3、灵敏度:<15 ugl/ml
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