用    途： 用于相关液体样本中卵黄蛋白原（VTG）的测定。

卵黄蛋白原(vitellogen in, VTG )是所有卵生动物Lv(卵黄脂磷蛋白)的前提，是一种脂磷蛋白, 为脂糖磷蛋白、脂卵黄磷蛋白和卵黄高磷蛋白的综合体。VTG分子量在170～600KDa之间, 它共价结合有糖和磷,非共价结合有脂类, 因此是一种磷脂糖蛋白。所有卵生动物其卵黄蛋白原在结构和功能上有很多相似之处。卵黄蛋白原含量与性类固醇激素之间存在密切关系。卵黄积累反映性腺发育情况, 不同时期VTG 含量不同, 在卵黄发生前期和初级卵黄发生期合成较快, 次级卵黄发生期合成较慢。

本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中卵黄蛋白原（VTG）的水平。向预先包被了卵黄蛋白原（VTG）单克隆抗体的酶标孔中加入卵黄蛋白原（VTG），温育；洗涤后，加入HRP标记过的卵黄蛋白原（VTG）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中卵黄蛋白原（VTG）的浓度呈正相关。

试剂盒组成

1．    37℃恒温箱。

2．    标准规格酶标仪。

3．    精密移液器及一次性吸头

4．    蒸馏水，

5．    一次性试管

6．    吸水纸

1．    从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．    各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

3．    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

4．    严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

5．    为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．    底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

1．    标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：

2．    分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。  

3弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

4每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。  

5弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

6每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

7取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

9 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

 

 

检测范围：6.67ng/ml→540ng/ml

规格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6个月（2-8℃）。