本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断 紧密连接蛋白1放免试剂盒说明书 CLAUDIN-1(HY-10261) RIA KIT 紧密连接蛋白(claudin)属于一个多基因家族,到目前为止,已有24种claudin成员被发现。紧密连接蛋白-1(Claudin-1)是其蛋白家族的一个成员,是一种完整的膜蛋白,分子量为23kDa,有4个疏水的跨膜区,两个细胞外环形结构和位于胞质中的羧基端、氨基端。紧密连接具有将上皮细胞联合成整体的机械作用,加强细胞间的连接,使细胞不易受破坏。炎症介质、细菌、病毒、过敏原及基因突变等原因引起claudin及其结合的蛋白结构改变,使紧密连接破坏,屏障功能受损,组织渗透性提高,导致多种疾病的发生,如过敏性疾病、遗传性疾病及先天性疾病和感染性疾病等。
测定原理:本药盒应用放射免疫分析方法测定。根据竞争机制原理,125I-CLAUDIN-1与抗体的结合量与标准或样品中的CLAUDIN-1的含量呈一定函数关系。用免疫分离剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,通过数据处理可求出样品中CLAUDIN-1的浓度值。
药盒应用: 用于骨代谢的研究
药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1、 缓冲液(PBS)1瓶。 2、 PR分离剂(第二抗体) 3、 CLAUDIN-1抗体1瓶:用前充分摇匀 4、125I- CLAUDIN-1标记 1瓶: 5、CLAUDIN-1标准品6瓶,浓度为3.91、7.81、15.625、31.25、62.5、125pg/ml
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: CLAUDIN-1 RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 100 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- CLAUDIN-1 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。
结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项: 本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释 本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标: 1. NSB:10% 2. 灵敏度:<20pg/ml 3. 标准曲线范围:0~6400pg/ml 4. 批内变异系数:CVw<9.3 %。 5. 批间变异系数:CVw < 10.4% 。 6. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 7.5±3.56pg/ml(n=25)。 本次药盒参考数据: —————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 —————————————————————————————— CPM —————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————— 生产日期:2014-05-18 有效日期:2014-06-18 生产批号:20140518
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