本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3 放免试剂盒说明书 CASPASE-3(HY-L0012) RIA KIT 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Activation of caspase protein -3)是IL-1β转化酶家族成员之一,其编码产物为32α和32β两型,其可读框均由831个核苷酸组成,编码277个氨基酸,分子量为32kDa。广泛分布于各种不同类型的细胞中,是Caspase家族中最重要的凋亡执行者之一,激活的Caspase-3能使许多与细胞结构、细胞周期及DNA修复等相关蛋白或激酶失活,从而使细胞凋亡。 测定原理:本药盒应用放射免疫分析方法测定。根据竞争机制原理,125I-CASPASE-3与抗体的结合量与标准或样品中的CASPASE-3的含量呈一定函数关系。用免疫分离剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,通过数据处理可求出样品中CASPASE-3的浓度值。 药盒应用: 用于肿瘤细胞凋亡的研究 药盒组成:(常温运输,4℃保存) 1、缓冲液(PBS)1瓶。 2、PR分离剂(第二抗体) 3、CASPASE-3抗体1瓶:用前充分摇匀 4、125I- CASPASE-3标记 1瓶: 5、CASPASE-3标准品6瓶,浓度为5、10、20、40、80、160ng/ml 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: CASPASE-3 RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 100 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- CASPASE-3 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ———————————————————————————— 混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。 结果计算: 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 注意事项: 本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释 本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻) 本试剂盒主要技术指标: 1. NSB:8% 2. 灵敏度:<0.5ng/ml 3. 标准曲线范围:5~160ng/ml 4. 批内变异系数:CVw<8.4 %。 5. 批间变异系数:CVw < 10.5.5% 。 6. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 15±3ng/ml(n=25)。 本次药盒参考数据: —————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 —————————————————————————————— CPM —————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————— 生产日期:2014-04-10 有效日期:2014-05-10 生产批号:20140410 地 址:北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业 园东区1号楼12层12A 北京华英生物技术研究所 邮 编: 100036 电 话: (010)88114651 免费电话: 8008109828
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