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                                                                                                                      科研药盒,慎用于临床
  纤溶酶原激活物抑制因子放免药盒操作说明书
                                 PAI-1(HY-H0051)RIA  KIT
     PAI-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)是一种相对分子质量为50 kD的由379个氨基酸残基构成单链糖蛋白,等电点约4. 5~5. 5,人类PAI-1基因定位于7号染色体q21. 3~q22上,片断大小约12. 3kb,包含9个外显子和8个内含子。PAI-1在体内有三种存在形态,即活性态、潜在活性态和底物态。体内PAI-1大多以潜在活性态形式存在,正常人血浆中活性态PAI-1仅占3%~5%。只有活性态的PAI-1对组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)起抑制作用,从而使活性纤溶酶生成减少,导致纤维蛋白降解减少,给血栓形成创造了有利条件。在人体内, PAI-1的mRNA存在于血管内皮、单核细胞、血小板、脂肪、胎盘、胎儿肝、成纤维细胞、肺等器官、组织和细胞中,在血管内皮、脂肪、肝脏和脾脏中含量最为丰富,而脑及心脏含量较低。PAI-1的主要生理功能为:(1)特异性抑制PA,调节纤溶活性,维持纤溶-凝血系统的平衡; (2)抑制PA对纤维蛋白的水解和细胞外基质作用,影响平滑肌细胞迁移、组织修复、胶原酶激活以及肿瘤生长转移; (3)影响血管损伤后的重塑过程。利用抗原抗体特异性结合的特点,用液相竞争法原理建立了快速、简便的PAI-1放射免疫方法,对血浆浓度进行直接检测。 

标本采集:肝素抗凝或者EDTA抗凝取血,4℃离心分离血浆
药盒组成】(常温运输,4℃保存)
1、 PAI-1缓冲液(液体)1瓶,10ml,用前加蒸馏水稀释到50ml。
2、 PR分离剂(第二抗体)1瓶,60ml。
3、 PAI-1标准品(冻干品)6瓶浓度为0、10、20、40、80、160ng/ml
4、 PAI-1抗体1瓶(冻干品)。
5、 125I – PAI-1 1瓶(冻干品)。
测定方法
                        PAI-1  RIA加液程序    (单位: ul )
          ————————————————————————————
             试   剂      T     NSB     S0     S1~S6     样  品
          ————————————————————————————
            缓 冲 液    ——    200      100    ——     ——
            标 准 品    ——    ——    ——    100      ——
            样    品     ——    ——    ——     ——       100
            抗    体     ——    ——    100     100      100
     125I- PAI-1    100     100     100     100     100
          ————————————————————————————
                          充分摇匀4℃温育24小时以上
          ————————————————————————————
           分 离 剂    ——     500     500     500       500
          ————————————————————————————
    混匀,室温放置15分钟后,4℃ 3500转/分 离心 15分钟 ,弃上清液,测沉淀cpm。
计算结果
     以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序,直接给 出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项
       本月标准品每瓶用      ml缓冲液稀释  
       本月药盒抗体每瓶用    ml缓冲液稀释
       本月药盒标记每瓶用    ml缓冲液稀释
       本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
主要技术指标
   1、灵敏度:<0.1ng/ml。
   2、测定范围:0-160 ng/ml
   3、准确性:回收率:91.7% ~101.3% ,平均回收率95.6%。
   4、批内变异系数:CVw<4.5 %,
        批间变异系数:CVw < 9.5% 。
   5、正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                 正常值范围9.5-80ng/ml
 本月药盒参考数据:
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    T     NSB     S0    S1       S2        S3       S4       S5      S6 
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 CPM
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    N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
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      生产日期:2012-02-20
      有效日期:2011-03-20
      生产批号:20120220
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