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                                                                                                            科研药盒,慎用于临床
          信号转导和转录活化因子放免药盒操作说明书
                              STAT1(HY-H0059) RIA  KIT
      信号转导和转录活化因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)介导的信号转导有别于传统的信号级联转导系统,无需细胞内蛋白作为信使,直接将细胞外的信号传至细胞核内,从而调节细胞的增殖、分化和凋亡等重要生理活动。信号转导子与转录活化因子1(STAT 1)是连接多种细胞膜受体与选择性效应器之间信号转导的重要蛋白,STAT 1的水平及其活性变化调节着许多生理、生化、免疫反应以及与其相关基因表达,在细胞对细胞因子的应答、细胞活化、细胞分裂及细胞增殖中起重要的作用,而且STAT1是STAT家族中唯一可能对肿瘤细胞的生长起负性调节作用的蛋白.
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1、 STAT1缓冲液(PBS)1瓶
2、 PR分离剂(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3、 STAT1标准品5瓶,浓度为0.625、1.25、2.5、5、10、20、40ng/ml
4、 STAT1抗体1瓶。
5、 125I - STAT1  2瓶(冻干品)。
样品收集
    取静脉血2ml ,注入试管中待凝固后,分离血清,-20℃保存2个月。测定前置室温或冷水中复融,混匀后,4℃ 3000rpm/ min 离心5 min,取上清测定。
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
                       STAT1  RIA加液程序    (单位: ul )
           ————————————————————————————
              试   剂         T     NSB      S0     S1~S7    样  品
           ————————————————————————————
              缓 冲 液    ——    200     100     ——      ——
              标 准 品    ——    ——    ——    100       ——
              样    品      ——    ——    ——    ——       100
              抗    体     ——    ——    100     100       100
    125I-STAT1      100     100     100     100       100
           ————————————————————————————
                              摇匀4℃ 放置24小时
           ————————————————————————————
              分 离 剂    ——   500      500     500       500
           ————————————————————————————
混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:  
      本月标准品每瓶用   0.5       ml 缓冲液稀释
      本月药盒抗体每瓶用   10     ml缓冲液稀释
      本月药盒标记每瓶用  5.0     ml缓冲液稀释
      本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<6%。
2、 灵敏度:<0.1ng/ml。
3、 标准曲线范围:0.625~40ng/ml。
4、 批内变异系数:CVw<7.0 %;
      批间变异系数:CVw < 10% 。
5、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                 2.5-4.8ngmlL
本月药盒参考数据:
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         T     NSB     S0       S1      S2      S3      S4        S5    
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 CPM
 —————————————————————————————————————————
        N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
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      生产日期:2013-01-12
      有效日期:2013-02-12
      生产批号:20130112
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