II型脱碘酶试剂盒说明书 D2(HY-600234) KIT 脱碘反应是调节甲状腺激素生物活性的重要方式,体内主要存在三种形式的脱碘酶(D1,D2,D3),它们均为含硒酶,其活性中心均含有硒代半胱氨酸残基,由250~280个氨基酸组成,分子量约2.5~3万Da。D2主要存在于脊椎动物的中枢神经系统,可催化T4 脱碘生成T3,所以D2对中枢神经系统中甲状腺激素的代谢非常重要。 反应原理:在单位时间内,以125I –T4为底物,在D2作用下,匀浆液中的125-I-T4转化为T3,125-I 游离在上清液中,利用特殊的分离剂,将上清分离出来,测沉淀CPM。 试剂盒组成: 试剂1:匀浆介质液 1瓶 试剂2:孵育液 1瓶 试剂3:标记物125I –T4 1瓶 试剂4:底物T4 1瓶 试剂5:终止液 1瓶 标本处理: 取试剂1 0.5毫升对标本进行匀浆,离心取上清备用 操作步骤: D2操作步骤 单位(ul) ———————————————————————————— 试 剂 T 对照管 空白管 测定管 ———————————————————————————— 匀浆介质 —— 100 —— —— 孵育液 —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— 100 试剂1 —— 100 100 100 试剂2 —— 100 100 100 试剂3 100 100 100 100 试剂4 —— 100 100 100 ———————————————————————————— 37℃ 孵育 30分钟 ———————————————————————————— 试剂5 —— 300 300 300 ———————————————————————————— 混匀,室温放置10分钟后,3500 转/分 4℃离心10 min,取上清液100微升,测CPM值 结果计算: D2活性(pmol/mg.h)=(匀浆液的CPM-对照管CPM)/样品量(ul)*SA(比活性pmol/100ul)/蛋白含量(mg/ml)/时间(h) 注意事项: 1. 标记物不能反复冻存 2. 上清液推荐用总T减去沉淀计数 本试剂盒主要技术指标: 1、 批内变异系数:CVw<7.5%; 批间变异系数:CVw < 9.5% 。 2、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 生产日期:2015-07-10 有效日期:2016-01-10 生产批号:20150710 地址:北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A 北京华英生物技术研究所 邮编: 100085 电话: (010)88114651 免费电话:8008109828
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