T淋巴细胞转化试验 一、 原理 T淋巴细胞在体外培养时,受到植物血凝素PHA的刺激,可使小淋巴细胞转化为体积较大,代谢旺盛,且能进行有丝分裂的淋巴母细胞。转化的淋巴母细胞不仅呈现不成熟的母细胞形态,以及蛋白质和核酸的增加,而且还能合成和释放淋巴毒素、移动抑制因子等淋巴因子。因此,可用B淋巴细胞转化试验检查体内对相应抗原的迟发型变态反应,以及计算在PHA刺激下转化成母细胞的数目反映机体内的细胞免疫功能。 二、 操作步骤 1、取抗凝血3毫升,500转/分离心10分钟,小心取中层(血浆与红细胞之间的白色膜) 2、用加HanK’S液2毫升,3500转/分.离心10分钟,去上清。洗涤2次。 3、用PRMI 1640稀释细胞用血球仪计数白细胞,使其密度为1*107个/毫升的白细胞悬液。 4、分装成2管,在1管(样品管)中加10%小牛血清和用PRMI稀释的PHA(浓度5微克/100微升)各100微升。另一管(对照管)加10%小牛血清和PRMI 各100微升。混匀。 5、取上述100微升加入96孔板细胞培养板内,设2个重复管,在5%CO2 37度、饱和湿度下培养48小时,每孔加5mg/ml MTT 10ul 培养4小时,再加10%SDS -0.04MHCl,100ul . 6、培养2小时后,取出,室温放置5分钟。用酶联免疫检测仪,在570nm测量OD值 三、计算结果 T淋巴细胞转化率=OD值(样品管)-OD值(对照管)
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