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您的位置:首页 >> 产品介绍 >> 双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法检测抗原,间接法、双抗原夹心法、捕获法检测抗体
 
 

●简介

  我所目前采用的酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA)是酶免疫测定技术中发展最快、应用最广、也是最成功的技术。ELISA具有高度的敏感性和特异性,操作简便,操作程序规范化和自动化的特点,已广泛用于检测多种病原体抗原或抗体、血液及其他体液中微量蛋白成分、细胞因子等。

原理

  1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。 

常用方法:

  根据检测目的和操作步骤不同,ELISA 有以下常用方法:双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法检测抗原,以及间接法、双抗原夹心法、捕获法检测抗体等。

 优点

1、 灵敏度高  ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

2、 特异性强 抗原抗体反应具有高度的特异性,实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。

 

检测项目:

 

项目名称

检测方法

测量范围

标本收集(ul)

规格(T)

 

       甲状腺素系列

 

T3/三碘甲状腺原氨酸

双抗

0.5-8 ng/ml

血清100

100T/50T

T4/甲状腺素

双抗

20-320 ng/ml

血清100

100T/50T

TSH/促甲状腺素

双抗

1.8-60 uIU/ml

血清100

100T/50T

TG/甲状腺球蛋白

双抗

10-400 ng/ml

血清100

100T/50T

TPO-Ab/甲状腺素过氧化物酶抗体

双抗

10-500 IU/ml

血清100

100T/50T

PTH/甲状旁腺素

双抗

50-2500 ng/ml

血清100

100T/50T

 

 

 

 

 

 

        肿瘤系列

 

AFP/甲胎蛋白

双抗

10-400 ng/ml

血清100

100T/50T

CEA/癌胚抗原

双抗

5-80 ng/ml

血清100

100T/50T

Feritin/铁蛋白

双抗

5-320 ng/ml

血清100

100T/50T

CG/甘氨酸

双抗

0.25-40 ug/ml

血清100

100T/50T

 

 

 

 

 

 

       性激素系列

 

FSH/促卵泡成熟激素

双抗

2.5-100 mIU/ml

血清100

100T/50T

LH/促黄体生成激素

双抗

2.5-100 mIU/ml

血清100

100T/50T

PRL/垂体泌乳素

双抗

125-2000 mIU/ml

血清100

100T/50T

TESTO/睾酮

双抗

0.1-20 ng/ml

血清100

100T/50T

PROG/孕酮

双抗

0.1-100 ng/ml

血清100

100T/50T

E2/雌二醇

双抗

10-2000 pg/ml

血清100

100T/50T

E3/雌三醇

双抗

10-400 ng/ml

血清100

100T/50T

 

 

 

 

 

 

       心血管、糖尿病系列

 

INS/胰岛素

双抗

5-160 uIU/ml

血清100

100T/50T

C-P/C-肽

双抗

0.125-40 pmol/ml

血清100

100T/50T

Glucagon/胰高血糖素

双抗

50-800 pg/ml

血清100

100T/50T

C-TNI/肌钙蛋白

双抗

 

血清100

100T/50T

AI/血管紧张素AI

双抗

0.19-6.0 ng/ml

血清100

100T/50T

AII/血管紧张素AII

双抗

25-800 pg/ml

血清100

100T/50T

 

 

 

 

 

 

       细胞因子系列

 

IL-2/白细胞介素2

双抗

1-81 ng/ml

血清100

100T/50T

IL-4/白细胞介素4

双抗

1-81 ng/ml

血清100

100T/50T

IGF-1/胰岛素生长因子1

双抗

0.1-8.1 ng/ml

血清100

100T/50T

h-EGF/表皮生长因子

双抗

50-4000 pg/ml

血清100

100T/50T

RESISTIN/抵抗素

双抗

0.3-21.60 ng/ml

血清100

100T/50T

(详见公司首页左侧“实用工具”内的《2017年产品目录》)

 

样本要求:

1.客户提供含待测样品的标本(血清、血浆等),我们根据客户的需要(定性、定量)制定技术服务路线。

2.检测的样本为细胞培养液、动物血清、血浆时,样本收集后立即4度保存,若长期保存就放在-20度或-80度保存,切忌反复冻融。

3.样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250微升,做单孔检测就不少于120微升。建议若客户样本量充足最好提供500微升以上。

4.检测样本范围:细胞培养液、血清、血浆、腹水、分泌物、提取物、细胞或组织匀浆等。

   

服务流程:

1、根据客户所提供的样本进行登记、编号,利用试剂盒进行相关项目的检测。

2、数据计算结果。

3、提供实验报告:包括详细的实验方法及实验结果的相关图表。

 

常见问题:

 

 

问题

序号

可能原因

解决方法

显色淡,灵敏度偏低

1

 试剂盒未充分平衡

试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)

 

 

样品一般选择培养上清、血清、血浆。

 

 

 

2

 包被抗体遭到破坏

操作温和,移液枪不能碰到孔底

3

 样本和抗体孵育条件不合适

按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。

4

 洗涤浸泡时间过长

按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间;

5

 偶联HRP试剂污染

弃去试剂,重新配置

 

 

 

 

 

 

6

 样本浓度过高或存在基质效应

建议做不同稀释倍数,确认样本最佳稀释倍数。

 

 

 

7

 酶标板不适合做ELISA

不能使用细胞培养板,建议使用ELISA专用高吸附力板子。

背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

1

 洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留

洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。

2

 底物污染,未避光保存,出现颜色

弃去底物,重新配置

 

 

 

 

 

 

3

 不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间)

最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。完全按照说明书要求。

4

 偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高

按照说明书调整到最佳的浓度

 

 

 

5

 没有正确封闭

在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

6

 样本溶血严重

建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。

重复性不佳,高CV值

1

 样品不均一

加样前充分混匀样品,取样确保移液位置一致;

2

 包被板表面遭到破坏

洗板加样时尽量小心,避免破坏板的包被表面

3

 孔与孔之间的交叉污染

孵育后取下盖子小心操作,避免孔与孔的污染;封板膜不能重复使用

4

 加样量不一致

样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

5

 边缘效应(外周孔显色较中心孔深)

孵育时尽量100 rpm旋转混匀

 

 

 

6

 不正确的洗涤

洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,确定每一步的洗涤

标曲很好,但是样本无法计算到数值

1

 标曲选择不合适

选择最合适的标曲拟合;

2

 样本含量很低,低于灵敏度无法被检测到

尝试浓缩样本或使用高敏ELISA试剂盒检测

3

样本含量很高,超过标曲

建议进行预实验摸索稀释倍数,确保样本OD值落在标曲范围内

 

 
合作单位
3、提供实验报告:包括详细的实验方法及实验结果的相关图表。
 
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