内皮型一氧化氮合酶酶联免疫试剂盒使用说明书 eNOS ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。 一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase)位于神经系统,其同功酶有三种亚型,即在正常状态下表达的神经元型一氧化氮合酶(Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)以及在损伤后诱导表达的诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)。内皮型一氧化氮合酶于血管内产生一氧化氮及协助调节血管功能,是与原生膜所包围的细胞及与细胞内的高基氏体膜联合。 样品处理:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月 药盒组成: 1) 酶标试剂HRP 1 瓶 2) eNOS抗体1瓶 3) eNOS标准品6瓶:0、1.5、3.125、6.25、12.5、25U/ml。 4) 封闭液 1瓶 5) 终止液 1瓶 6) 96微孔板1块 7) 显色液1瓶 8) 稀释液1瓶 9) 洗涤液 10) 说明书 11) 封板膜 12) 密封袋 操作方法: 1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释): 2) 每孔加入抗体100ul包被2小时 3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。 4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟 5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。 6) 每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀 7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟 8) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。 9) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟 10) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项 1) 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2) 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差 3) 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数 4) 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 5) 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 6) 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7) 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。 洗板方法 1) 手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。 2) 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实 本试剂盒主要技术参数: 标准范围:0-25U/ml 灵敏度: <0.15U/ml 精密度:批内CV<9.5%,批间CV<10% 正常参考值:12±5U/ml 规格: 96T/盒 保存: 2-8℃ 有效期: 6个月(2-8℃)。 地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A 北京华英生物技术研究所 邮编:100085 电话:010-88114651 传真:010-88112680 免费电话:8008109828
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