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您的位置:首页 >> 产品介绍 >> 异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒说明书
 
 
三羧酸循环中,异柠檬酸脱氢酶的催化异柠檬酸氧化脱羧生成α-酮戊二酸,反应脱下的氢由NAD+接受生成NADH+H+,脱羧使6碳化合物变为5碳化合物。这是三羧酸循环中第一次氧化脱羧生成CO2的反应。此反应不可逆,是三羧酸循环中的限速步骤。异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase 有两种类型的酶:要求以NAD为辅酶的酶(EC1.1.1.41)和要NADP的酶(EC1.1.1.42),两者催化同一反应。在三羧酸循环中正常起作用的是要求NAD为辅酶的酶,此酶是为ADP激活的变构酶。
 
一、反应原理:
 
在pH 7.5的Tirs-HCI缓冲体系中,ICD催化异柠檬酸脱羧产生a-酮戊二酸 ,同时产生NADPH ,通过监测NADPH产生速率 ,计算出ICD 的活力,在本实验条件下,每升血清每分钟催化产生1umolNADPH 的酶量为一个国际单位。
 
二、试剂盒组成:
 
R1:液体    1瓶
R2:液体    1瓶
R10.1 mol/L Tris-HCl缓冲液,含 MnCl₂ 2 mmol/L,NADP 0.2 mmol/L,pH 7.5。
R280 mmol/L 异柠檬酸三钠,取异柠檬酸206mg 溶于10ml蒸馏水中。
 
三、操作步骤:
 
 异柠檬酸脱氢酶操作步骤      单位(ul)
——————————————————————————————————————
                             标准品                样本
——————————————————————————————————————
标准品                  50                     ——
样本                    ——                   50
试剂一 R1               400                    400
试剂二 R2               20                     20
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混匀     10分钟       340nm   终点法
 
四、计算结果:
 
有半自动和全自动生化仪的直接定标,空白调零,在机器上直接读取结果。
有分光光度计的,将标准品用缓冲液(R1)进行倍比稀释后在分光光度计上读取OD值,将未知标本的OD值在曲线上查出对应的浓度值。
 
五、正常参考值:
 
各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考:2.22-6.02 U/L
 
六、注意事项:
 
1. 样品测定值超过上限,用生理盐水稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准,准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断,内含叠氮钠,应避免直接接触皮肤和眼睛,切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存,避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
 
七、本试剂盒主要技术指标:
 
1、线性范围:0-60 U/ml
2、精密度:批内变异系数:CVw<7.3%;
       批间变异系数:CVw < 10%
3、灵敏度:<1 U/ml
 
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