内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳定，抗原性弱 细菌内毒素的实质是革兰阴性菌细胞壁中脂多糖，内毒素发挥作用的关键依赖于下游的信号分子，其中作为内毒素的天然配体TLR4跨膜蛋白起重要作用

检测原理：在适宜条件下，细菌内毒素激活催化鲎试剂里的一系列酶促反应，形成凝固酶，凝固酶分解显色基质，释放出有色基团，该有色基团可以用光度法检测分析。在一定时间内，有色基团的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量样品里的内毒素浓度。

试剂盒组成：

试剂1（R1）：鲎试剂               1瓶 

试剂2（R2）：显色基质             1瓶

试剂3（R3）：终止液               1瓶

试剂4（R4）：偶氮化试剂 1# 2# 3#  3瓶

试剂5（R5）：缓冲液               1瓶  

试剂6（R6）：无热原水             1瓶

标准品：                          1瓶

标本处理：待测样品需储存在细菌生物活性最低的条件下。

（1）在无热原试管内分别加入样本，标准品和阴性对照管，阴性对照管只加入无热原水

（2）各管里分别加入 100μl 鲎试剂，轻轻摇晃混匀，避免起泡。

（3）混匀，37度孵育60分钟

（4）孵育结束后，立即各加入 100μl 显色基质，轻轻摇晃混匀，避免起泡，盖上试管盖，

37度孵育106 分钟。

（5）孵育结束后，立即各加入 500μl 反应终止液，混匀，然后各加入 500μl 偶氮化试

剂#2，混匀，最后各加入 500μl 偶氮化试剂#3，混匀。

（6）静置 5 分钟，于 545nm 波长处读取吸光度值。

                           内毒素操作步骤    （ul）

—————————————————————————————————————

                    阴性对照          标准管          样本

——————————————————————————————————————

样本              ——            ——              100

阴性对照           100             ——              ——

标准品             ——             100              ——

无热原水           100              ——             ——

  鲎试剂           100              100              100

——————————————————————————————————————

                   混匀    37度孵育60分钟 

——————————————————————————————————————

显色基质：            100              100              100

——————————————————————————————————————

混匀     37度孵育10分钟

——————————————————————————————————————

终止液              500             500              500

——————————————————————————————————————

                           混匀

——————————————————————————————————————

 偶氮化试剂2#          500         500          500

——————————————————————————————————————

                              混匀

——————————————————————————————————————

偶氮化试剂3#           500          500          500

——————————————————————————————————————

              混匀，静置5分钟，于545nm处读取吸光度值

  适用于分光光度计：将标准品用缓冲液（R1）进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标

对应管的吸光度OD值为纵坐标作图，待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。

全自动或半自动生化仪直接读取数据

各实验室应建立自己的正常值，下列正常参考值仅供参考：0.4-1.5EU/ml

 

1、线性范围：0.1-5EU/ml

2、精密度：批内变异系数：CVw<7.3%；

      批间变异系数：CVw < 10%

3、灵敏度：<0.01  EU/ml

 

有效期： 6个月

生产批号：20170905