胃蛋白酶原II酶联免疫试剂盒使用说明书
PGII (HY-I0032) ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)是胃部分泌的一种消化酶前体,依其免疫原性的不同分为两个亚群:胃蛋白酶原I(PGI)和胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)。PGII来源于全胃腺(胃贲门腺、胃底腺、胃窦幽门腺)和远端十二指肠Brunner氏腺,前列腺和胰腺也产生少量PGII,胃粘膜合成的PGII约为总量的25%。合成后的PG大部分进入胃腔,在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶,只有少量(约1%)PG透过胃粘膜毛细血管进入血循环。血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能:PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针,胃酸分泌增多PGI升高,分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低;PGII与胃底粘 膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜),其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关;PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此,联合测定PGI和PG I/II比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。
标本收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
药盒组成:
1)PGII酶标试剂HRP 1 瓶。
2)PGII抗体1瓶。
3)PGII标准品6瓶,浓度为10、20、40、80、160、320ng/ml
4)终止液 1瓶。
5)96微孔板1块
6)显色液1瓶。
7)稀释液1瓶
8)洗涤液
9)封闭液
10)包被液
11)说明书
12)封板膜
13)密封袋
操作方法:
1)标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):
2)每孔加入抗体100ul包被2小时
3)弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4)每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5)弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6)每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀
7)每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
8)弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
9)每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
10)每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11)测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1.从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3.建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7.底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a)不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b)标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-320ng/ml
灵敏度: <1ng/ml
正常参考值: 40±10ng/ml
规格:96T/盒
保存:2-8℃
有效期:6个月(2-8℃)。
批号:20181112
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
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